国产精品亚洲第一区在线观看_久久精品卫校国产小美女_色欲久久久天天天综合网精品_国产亚洲精品第一综合另类灬

用途：本(ben)試劑(ji)盒僅供科研(yan)使用，定量檢測細胞(bao)液、體液、組織、血清(qing)、血漿等標(biao)本(ben)中大鼠溶血磷脂酰(xian)膽(dan)堿(LPC)的含量(liang)。

原理：

采用雙抗體(ti)夾心法測定MTHFD2水平。用純化(hua)的(de)MTHFD2抗體(ti)包被微孔板，制成固相載

體，實驗(yan)時依次(ci)在(zai)微孔板中加(jia)入樣本及標(biao)準品(pin)，并(bing)加(jia)入 HRP 標(biao)記(ji)的 ABP 抗體，形(xing)成(cheng)抗體-抗原-酶(mei)標(biao)抗體復(fu)合物，反復(fu)洗滌后加(jia)底(di)物 TMB 顯色(se)。TMB 在(zai)過氧化(hua)物酶(mei)的催化(hua)下轉化(hua)為藍(lan)色(se)，再用硫(liu)酸終止反應，轉變成(cheng)黃色(se)。顏色(se)的深淺和樣品(pin)中的 ABP含量呈(cheng)正相關。采用酶(mei)標(biao)儀在(zai) 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標(biao)準曲線，計算(suan)測試樣品(pin)中 ABP 濃度。

試劑盒組成：

實驗(yan)材料(liao)與試劑配制：

1. 儀器與(yu)材(cai)料：酶標儀（使用前預熱30分(fen)鐘(zhong)），微(wei)量加液器、吸頭(tou)、蒸餾水(shui)或(huo)去離子水(shui)，濾紙。

2. 緩(huan)沖(chong)液使用(yong)：加5ul 的緩(huan)沖(chong)液于50ul 的樣品(pin)中，如果樣品(pin)量不(bu)(bu)夠或(huo)者不(bu)(bu)確定(ding)，緩(huan)沖(chong)液和樣品(pin)的混合比(bi)例不(bu)(bu)要小于1:10即可。

混勻，靜(jing)置1小時備用（如果標本是血(xue)清或者(zhe)血(xue)漿(jiang)，此(ci)步驟忽略）。

3. 洗液的配(pei)制：按1:100的比例配(pei)制洗液備用。

樣(yang)品收集、處理及保存：

1. 細胞(bao)培養上清(qing)(qing)：適用于檢測體(ti)外培養的細胞(bao)分泌(mi)性成份。用無菌管收集細胞(bao)上清(qing)(qing)液(ye)，以1000×g離心15分鐘(zhong)，收集上清(qing)(qing)。

2. 細(xi)胞(bao)(bao)：用PBS反復洗滌細(xi)胞(bao)(bao)3次，調(diao)整(zheng)細(xi)胞(bao)(bao)濃度(du)達到104

-106/ml 左右，通過(guo)反復凍融(rong)，使細胞(bao)破(po)壞并放出(chu)細胞(bao)內成份，或

者細(xi)胞(bao)超聲粉(fen)碎，離心取(qu)上清液檢(jian)測。

3. 血清(qing)：在(zai)室溫下，血液自然(ran)凝固，以1000×g離(li)心15分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)待(dai)測。

4. 血漿：應根(gen)據標本的要求選擇EDTA 或檸檬(meng)酸鈉作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑，混合后靜置10-20 分(fen)鐘后，以1000×g離心15分(fen)鐘，收集上清。

5. 體(ti)液：包(bao)括胸腹水、腦脊(ji)液，分泌(mi)物等。使用不含熱原和(he)內(nei)毒素的離心管收(shou)集，以(yi)1000×g離心15分鐘，收(shou)集上清(qing)。

6. 組(zu)織標(biao)本：切取組(zu)織標(biao)本，稱取重(zhong)量(liang)0.5mg，加入(ru)500ul 的PBS，用手工或勻(yun)漿器，或超聲破(po)碎儀將標(biao)本勻(yun)漿，以2000-3000

rmp離(li)心20 分鐘，收集(ji)上清進行檢測。

7. 樣品中不(bu)能含有NaN3，因NaN3 抑制(zhi)辣根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。

8. 保(bao)存：如果樣品不能立即(ji)檢測，應將其(qi)分裝，-70 ℃保(bao)存，避免反復冷凍。保(bao)存過程(cheng)中如出現沉淀，應再次離心。血液標

本盡可能的不要使用(yong)溶血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如果血(xue)清(qing)中含大量顆粒，檢測前先離心(xin)或(huo)過濾。不要在37℃或(huo)更高的溫度加熱解(jie)

凍(dong)。應在室溫下解凍(dong)并確保樣品均勻地充分解凍(dong)。

操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放(fang)置(zhi) 30 分(fen)鐘。

2. 分(fen)組：取出(chu) 96 孔板，根據(ju)待測樣品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上標(biao)準品(pin)的(de)數(shu)量(liang)決定所需的(de)板條(tiao)數(shu)，把剩余(yu)的(de)板條(tiao)繼(ji)續冷藏處理。分(fen)別設標(biao)準

品組（6 個濃度(du)）、空白(bai)孔(kong)、待測樣(yang)品組。

注：為減少實驗(yan)誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3. 加(jia)(jia)樣：依(yi)照標準品(pin)的(de)順序分別加(jia)(jia)入 50ul 的(de)標準品(pin)溶液于空白微孔中；空白對照孔加(jia)(jia)入 50ul 的(de)蒸餾水；其余微孔中加(jia)(jia)入 50ul

的(de)待(dai)測(ce)樣本(ben)。

4. 加酶標(biao)溶(rong)液：標(biao)準(zhun)品組、待測(ce)樣本組各孔中加入 100ul 的(de)酶標(biao)溶(rong)液（空白對照孔除(chu)外）。

5. 溫育：酶標(biao)板用(yong)封板紙密封后，放入濕盒內于(yu) 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗板(ban)：用(yong)稀釋后的洗滌(di)液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶(mei)標板(ban) 5 次，用(yong)吸水紙徹底拍干。

7. 顯(xian)色(se)：各孔加入顯(xian)色(se)劑(ji) A 液 50ul 后，再(zai)加入顯(xian)色(se)劑(ji) B 液 50ul。

8. 終止(zhi)：25-37℃下避光(guang)反應(ying) 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終止(zhi)液。

9. 讀(du)板(ban)：在 450nm 波長(chang)讀(du)取各孔的 OD 值。

注意事(shi)項：

1. 實驗操(cao)作中必須使(shi)用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣(yang)：加樣(yang)時(shi)，要(yao)控制加樣(yang)速度(du)，避免**孔與最(zui)后一(yi)孔間的時(shi)間間隔(ge)過大，否則將(jiang)會導(dao)致不同的預孵育時(shi)間，從而影響

實驗的準確性(xing)(xing)以及(ji)重(zhong)復性(xing)(xing)。

3. 孵育(yu)：嚴格按照說明書(shu)上規(gui)定的孵育(yu)時間和溫(wen)度進行。

4. 反(fan)應時(shi)間的控制：加(jia)入底物后請定時(shi)觀察反(fan)應孔的顏色(se)變化，如果顏色(se)較深，請提前加(jia)入終止液終止反(fan)應。

5. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃(nong)度過高，應對樣品進行稀(xi)釋，計算結果時乘以相應的(de)稀(xi)釋倍(bei)數。

6. 建(jian)議使(shi)用本(ben)試劑盒時(shi)先做(zuo)預實(shi)驗（即先做(zuo)標(biao)(biao)準曲線，試用幾個標(biao)(biao)本(ben)），如果對本(ben)試劑盒有(you)任何疑(yi)問，可和所購經銷商聯系，

如果因運輸(shu)過(guo)程導致試(shi)劑盒失效(xiao)，可要(yao)求調(diao)換，但概不承(cheng)擔產品(pin)本(ben)身(shen)以(yi)外的任何(he)損失。

性能

1. 靈敏度：最(zui)小的(de)檢測濃度小于1號(hao)標(biao)準品。稀釋度的(de)線性。樣品線性回(hui)歸與預(yu)期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反(fan)應。

3. 重復性(xing)：板內、板間變異(yi)系數均小于(yu)10%。

結(jie)果判斷與(yu)分析(xi)

1、儀(yi)器值(zhi)：于波長(chang)450nm的酶標儀(yi)上(shang)讀取(qu)各孔(kong)的OD值(zhi)

2、以吸(xi)光度OD值(zhi)為縱坐(zuo)標（Y），相(xiang)應的待測物(wu)質標準品(pin)濃度為橫坐(zuo)標（X），做得相(xiang)應的曲(qu)線，樣品(pin)的待測物(wu)質含量可根據其OD值(zhi)由標準曲(qu)線換算出相(xiang)應的濃度。