植物(wu)磷(lin)酸核糖甲酰甘(gan)氨(an)酸脒合酶(mei)(PFAS)酶(mei)聯免疫分析試劑盒用途(tu)：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中植物(wu)脫落酸(ABA)的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)，實驗時依次(ci)在(zai)微孔(kong)板中(zhong)加入(ru)樣(yang)(yang)本及標準品(pin)，并加入(ru) HRP 標記的(de) ABP 抗體(ti)，形(xing)成抗體(ti)-抗原-酶標抗體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，反復(fu)洗滌后加底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)為藍色(se)，再用硫酸終(zhong)止反應(ying)，轉變成黃色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺和樣(yang)(yang)品(pin)中(zhong)的(de) ABP含量呈正相(xiang)關。采用酶標儀在(zai) 450nm 波長測定吸光度(du)（OD 值），根據(ju)標準曲(qu)線，計算測試樣(yang)(yang)品(pin)中(zhong) ABP 濃度(du)。
植物(wu)磷酸核糖甲酰甘氨酸脒合酶(PFAS)酶聯(lian)免疫分析試劑盒試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮(suo)洗滌液(ye) | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止(zhi)液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標(biao)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰(yin)性對(dui)照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品(pin)稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說(shuo)明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色(se)劑 B 液(ye) | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
植物(wu)磷酸核(he)糖甲酰甘氨酸脒(mi)合酶(PFAS)酶聯(lian)免疫分析試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分(fen)鐘），微量加液器、吸頭(tou)、蒸餾水或(huo)去(qu)離子水，濾紙(zhi)。
2. 緩沖液使用(yong)：加5ul 的緩沖液于50ul 的樣(yang)品(pin)中，如果樣(yang)品(pin)量不夠或者不確定，緩沖液和(he)樣(yang)品(pin)的混合比例不要小于1:10即可(ke)。
混勻，靜置1小時(shi)備(bei)用（如(ru)果標本是(shi)血(xue)清或者血(xue)漿，此步驟忽(hu)略）。
3. 洗液的配(pei)(pei)制：按1:100的比(bi)例配(pei)(pei)制洗液備(bei)用。
樣品收集、處(chu)理及保存：
1. 細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養上(shang)清(qing)(qing)：適用于檢(jian)測(ce)體(ti)外培(pei)養的細(xi)胞(bao)(bao)分(fen)泌(mi)性成(cheng)份。用無菌管(guan)收集細(xi)胞(bao)(bao)上(shang)清(qing)(qing)液，以1000×g離心15分(fen)鐘(zhong)，收集上(shang)清(qing)(qing)。
2. 細(xi)(xi)胞(bao)：用PBS反復洗(xi)滌細(xi)(xi)胞(bao)3次，調整細(xi)(xi)胞(bao)濃度(du)達到(dao)104
-106
/ml 左右(you)，通過反復凍融(rong)，使細胞破(po)壞并放出(chu)細胞內成份，或
者細胞超聲(sheng)粉碎，離心取上(shang)清液(ye)檢測。
3. 血清(qing)：在(zai)室溫下，血液(ye)自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清(qing)待測。
4. 血漿：應根據標本(ben)的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混(hun)合(he)后靜置10-20 分(fen)鐘后，以(yi)1000×g離心15分(fen)鐘，收集上
清。
5. 體液(ye)：包括胸(xiong)腹(fu)水、腦脊液(ye)，分泌物等。使用不含(han)熱原和內毒素的(de)離心管收集(ji)，以1000×g離心15分鐘，收集(ji)上(shang)清(qing)。
6. 組(zu)織標本：切取組(zu)織標本，稱取重量(liang)0.5mg，加入500ul 的PBS，用手(shou)工或勻(yun)漿器，或超聲(sheng)破碎儀將標本勻(yun)漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上清(qing)進行檢測。
7. 樣品中不(bu)能含有NaN3，因NaN3 抑制辣(la)根過氧化物酶(mei)的（HRP）活性。
8. 保存：如果(guo)樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反(fan)復冷凍。保存過程(cheng)中如出現沉淀，應再次離(li)心(xin)。血液標
本盡可能的不(bu)要使(shi)用溶血或(huo)高血脂血。如果(guo)血清中含大量顆粒，檢測前先離心或(huo)過濾。不(bu)要在37℃或(huo)更(geng)高的溫度加熱解(jie)
凍。應在室溫(wen)下解(jie)凍并(bing)確保(bao)樣品均勻地充分(fen)解(jie)凍。
植物(wu)脫落酸(ABA)酶(mei)聯免疫分(fen)析試劑(ji)盒操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放(fang)置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品(pin)數(shu)(shu)量加上標準品(pin)的(de)(de)(de)數(shu)(shu)量決定所需的(de)(de)(de)板條數(shu)(shu)，把剩余(yu)的(de)(de)(de)板條繼(ji)續(xu)冷藏處理。分別(bie)設標準
品組（6 個濃度）、空(kong)白孔(kong)、待測樣(yang)品組。
注：為減少實驗誤差(cha)，保證準確(que)性，建議設置復孔。
3. 加(jia)樣：依照標準品(pin)的順序分別加(jia)入 50ul 的標準品(pin)溶液于空白微孔(kong)(kong)中(zhong)；空白對照孔(kong)(kong)加(jia)入 50ul 的蒸餾水(shui)；其余微孔(kong)(kong)中(zhong)加(jia)入 50ul
的待(dai)測樣本。
4. 加(jia)(jia)酶(mei)標溶(rong)液：標準品組、待測樣本組各孔中加(jia)(jia)入 100ul 的酶(mei)標溶(rong)液（空(kong)白對(dui)照孔除(chu)外(wai)）。
5. 溫育(yu)：酶(mei)標板用(yong)封板紙(zhi)密封后，放(fang)入濕盒內于(yu) 37℃恒溫孵育(yu) 1 小時。
6. 洗板：用稀釋后(hou)的洗滌液注滿每孔(kong)，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸(xi)水紙徹底拍(pai)干(gan)。
7. 顯色(se)：各孔加(jia)入顯色(se)劑 A 液 50ul 后，再加(jia)入顯色(se)劑 B 液 50ul。
8. 終止(zhi)：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終止(zhi)液。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
植物磷酸(suan)核糖甲酰甘氨酸(suan)脒合酶(mei)(PFAS)酶(mei)聯免疫分析試劑盒(he)注意事項：
1. 實(shi)驗操(cao)作中必須使用一次(ci)性吸頭，避免交(jiao)叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免**孔(kong)與最(zui)后(hou)一孔(kong)間的時間間隔過大，否則將(jiang)會導致不同的預孵育時間，從而影響(xiang)
實驗的準確性以及重復性。
3. 孵育：嚴(yan)格(ge)按照說明(ming)書上(shang)規(gui)定的孵育時(shi)間和溫度進行。
4. 反應(ying)時間的(de)控制(zhi)：加入底物后(hou)請定時觀察反應(ying)孔的(de)顏(yan)色(se)變化，如果顏(yan)色(se)較深，請提前加入終止液終止反應(ying)。
5. 建議(yi)實驗前預測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)含量(liang)，如樣(yang)品(pin)(pin)濃度過(guo)高，應對樣(yang)品(pin)(pin)進行稀釋(shi)，計(ji)算結果時(shi)乘以相應的稀釋(shi)倍數。
6. 建(jian)議使用(yong)本(ben)試劑(ji)(ji)盒時(shi)先(xian)做預實驗（即先(xian)做標準(zhun)曲線，試用(yong)幾個(ge)標本(ben)），如(ru)果對本(ben)試劑(ji)(ji)盒有任(ren)何疑問，可和所購經銷商聯系(xi)，
如果因運輸(shu)過程導致試劑(ji)盒失(shi)效(xiao)，可(ke)要求調換，但概不(bu)承擔產(chan)品(pin)本身以外的任何損失(shi)。
植(zhi)物磷酸(suan)核糖甲酰甘氨(an)酸(suan)脒合酶(PFAS)酶聯免疫分析(xi)試劑盒性能
1. 靈敏度(du)：最小的(de)檢測濃度(du)小于(yu)1號標準品(pin)。稀釋度(du)的(de)線性(xing)。樣品(pin)線性(xing)回歸與預(yu)期濃度(du)相關系數R值為(wei)0.990。
2. 特異(yi)性：不與(yu)其它細(xi)胞因子反(fan)應。
3. 重復性：板內、板間(jian)變異系數均小于10%。
結果判(pan)斷與(yu)分析
1、儀器(qi)值(zhi)：于波(bo)長450nm的(de)酶標儀上(shang)讀取(qu)各孔的(de)OD值(zhi)
2、以吸光度(du)OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質(zhi)標準品(pin)濃度(du)為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品(pin)的待測物質(zhi)含量可根據(ju)其OD值由(you)標準曲線換算出相應的濃度(du)。
