植物(wu)脫落(luo)酸(ABA)酶聯免疫分析(xi)試劑盒(he)用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中植物脫落酸(ABA)的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)，實(shi)驗時依次在微孔板中加入樣(yang)(yang)本及標(biao)(biao)準品(pin)(pin)，并加入 HRP 標(biao)(biao)記的 ABP 抗(kang)體(ti)，形成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)物，反(fan)復洗滌后加底(di)物 TMB 顯色(se)(se)。TMB 在過氧化物酶的催化下(xia)轉化為藍(lan)色(se)(se)，再(zai)用硫(liu)酸(suan)終止反(fan)應，轉變成黃色(se)(se)。顏(yan)色(se)(se)的深(shen)淺和樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中的 ABP含(han)量呈正相關(guan)。采用酶標(biao)(biao)儀在 450nm 波長(chang)測定吸光度(du)(du)（OD 值），根據標(biao)(biao)準曲線(xian)，計算測試樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中 ABP 濃度(du)(du)。
植物脫(tuo)落酸(ABA)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫分析試劑盒試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮(suo)洗(xi)滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性(xing)對(dui)照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液(ye) | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液(ye) | 6ml×1 瓶(ping) | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色(se)劑(ji) B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋(dai) | 1 個 |
植物脫落酸(ABA)酶聯(lian)免疫分析(xi)試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶(mei)標儀（使用前預(yu)熱(re)30分鐘），微量加液器、吸(xi)頭、蒸餾(liu)水或去(qu)離子水，濾紙。
2. 緩沖(chong)液(ye)使用：加5ul 的緩沖(chong)液(ye)于(yu)50ul 的樣(yang)品中(zhong)，如果樣(yang)品量不(bu)夠或(huo)者不(bu)確(que)定，緩沖(chong)液(ye)和(he)樣(yang)品的混合比例不(bu)要小(xiao)于(yu)1:10即可。
混勻，靜置(zhi)1小時備(bei)用（如果標(biao)本是血(xue)(xue)清或者血(xue)(xue)漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配制：按(an)1:100的比(bi)例配制洗液備用。
樣品(pin)收集、處理及保存(cun)：
1. 細胞(bao)培養(yang)上(shang)清(qing)：適用于檢(jian)測體外培養(yang)的(de)細胞(bao)分(fen)泌性成(cheng)份。用無菌管收集細胞(bao)上(shang)清(qing)液，以1000×g離心15分(fen)鐘，收集上(shang)清(qing)。
2. 細胞(bao)：用PBS反復洗(xi)滌(di)細胞(bao)3次，調(diao)整細胞(bao)濃度達(da)到104
-106
/ml 左右，通(tong)過反復凍融，使細胞破壞(huai)并放(fang)出細胞內成(cheng)份(fen)，或(huo)
者(zhe)細(xi)胞(bao)超(chao)聲(sheng)粉(fen)碎，離心取上(shang)清液(ye)檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心(xin)15分鐘，取上(shang)清待(dai)測。
4. 血漿：應根據標(biao)本的要求選擇(ze)EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后(hou)(hou)靜置10-20 分鐘后(hou)(hou)，以1000×g離(li)心15分鐘，收集上
清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒(du)素的離心管收集(ji)，以1000×g離心15分鐘，收集(ji)上清。
6. 組(zu)織(zhi)標本：切(qie)取組(zu)織(zhi)標本，稱取重(zhong)量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工(gong)或勻(yun)漿器，或超聲破碎儀將標本勻(yun)漿，以2000-3000
rmp離心20 分(fen)鐘，收集上(shang)清進行檢測(ce)。
7. 樣(yang)品中不(bu)能含有(you)NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶(mei)的（HRP）活性。
8. 保(bao)存(cun)(cun)：如果樣品不能立即檢測，應(ying)將其分裝，-70 ℃保(bao)存(cun)(cun)，避(bi)免反復冷凍。保(bao)存(cun)(cun)過程(cheng)中如出(chu)現(xian)沉(chen)淀，應(ying)再次離心(xin)。血(xue)液標
本盡可能的不要使用溶血或(huo)高血脂(zhi)血。如果血清中含大量顆(ke)粒，檢測前(qian)先(xian)離心(xin)或(huo)過(guo)濾(lv)。不要在37℃或(huo)更(geng)高的溫度加熱解
凍(dong)。應在(zai)室溫下解(jie)凍(dong)并確保樣品均勻地充分解(jie)凍(dong)。
植(zhi)物(wu)脫落酸(ABA)酶聯免疫(yi)分析試劑(ji)盒操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分(fen)組(zu)：取出 96 孔板(ban)，根據待測樣品(pin)(pin)數量加上標(biao)(biao)準品(pin)(pin)的(de)數量決定所需的(de)板(ban)條數，把剩余(yu)的(de)板(ban)條繼續冷(leng)藏處理。分(fen)別設標(biao)(biao)準
品組（6 個濃度）、空白(bai)孔、待測(ce)樣品組。
注：為減少實(shi)驗誤(wu)差，保(bao)證準確性(xing)，建議(yi)設置復孔(kong)。
3. 加(jia)樣(yang)：依(yi)照(zhao)標準品的順序分別加(jia)入 50ul 的標準品溶液(ye)于空(kong)白微孔中(zhong)；空(kong)白對照(zhao)孔加(jia)入 50ul 的蒸餾(liu)水；其余微孔中(zhong)加(jia)入 50ul
的待測樣(yang)本。
4. 加(jia)酶標(biao)溶液(ye)：標(biao)準品組(zu)、待(dai)測(ce)樣(yang)本組(zu)各孔中加(jia)入 100ul 的酶標(biao)溶液(ye)（空白對照孔除(chu)外(wai)）。
5. 溫育：酶(mei)標板用(yong)封板紙(zhi)密(mi)封后，放入濕盒(he)內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗(xi)(xi)板：用(yong)稀釋后的洗(xi)(xi)滌液(ye)注滿每孔(kong)，靜置 15-30s，充分清洗(xi)(xi)酶標板 5 次，用(yong)吸水(shui)紙徹底拍干。
7. 顯色(se)：各(ge)孔加入(ru)顯色(se)劑 A 液 50ul 后，再加入(ru)顯色(se)劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光(guang)反應(ying) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液(ye)。
9. 讀板(ban)：在 450nm 波(bo)長(chang)讀取各孔的 OD 值。
植(zhi)物脫(tuo)落酸(ABA)酶聯免疫分(fen)析試(shi)劑盒(he)注意事項：
1. 實驗操作(zuo)中必須(xu)使用一(yi)次性吸頭，避免交叉污(wu)染。
2. 加(jia)樣(yang)：加(jia)樣(yang)時(shi)，要控制加(jia)樣(yang)速度，避(bi)免**孔與(yu)最后一孔間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔過大，否則將會導(dao)致不(bu)同(tong)的預孵育時(shi)間(jian)，從而影響
實驗(yan)的準(zhun)確性(xing)以及重復性(xing)。
3. 孵(fu)育(yu)：嚴(yan)格按照說明書上規定的孵(fu)育(yu)時間和溫度進行。
4. 反應時間的(de)控制(zhi)：加(jia)(jia)入底物后請定時觀察(cha)反應孔的(de)顏色(se)變化，如果顏色(se)較深，請提(ti)前(qian)加(jia)(jia)入終止(zhi)液(ye)終止(zhi)反應。
5. 建議實驗(yan)前預測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)含量，如樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)濃度過高，應對樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)進行(xing)稀釋，計(ji)算(suan)結(jie)果時乘(cheng)以相應的稀釋倍數。
6. 建議使用(yong)本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒時(shi)先做預實驗（即先做標(biao)準曲線(xian)，試(shi)(shi)用(yong)幾(ji)個標(biao)本(ben)），如果對本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒有任何疑問，可和所購(gou)經銷商聯系，
如果(guo)因運輸過程導致試(shi)劑盒失效，可要(yao)求調(diao)換，但概不承擔產品本身以外的任(ren)何損(sun)失。
植物(wu)脫落酸(ABA)酶(mei)聯(lian)免疫分析試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的(de)檢測濃度小于1號標準品。稀釋(shi)度的(de)線性。樣品線性回歸(gui)與預期濃度相關系數(shu)R值為0.990。
2. 特(te)異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
結果判斷與分析(xi)
1、儀器(qi)值：于波長(chang)450nm的酶(mei)標(biao)儀上讀取各孔的OD值
2、以(yi)吸光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應(ying)(ying)的(de)待測物質標(biao)準品(pin)濃度(du)為(wei)橫坐(zuo)標(biao)（X），做得相(xiang)應(ying)(ying)的(de)曲(qu)(qu)線，樣品(pin)的(de)待測物質含量可根據其OD值(zhi)由標(biao)準曲(qu)(qu)線換算出相(xiang)應(ying)(ying)的(de)濃度(du)。
