小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中MTHFD2的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)，實驗時依次在微孔板中(zhong)加入樣本及標(biao)(biao)準(zhun)品，并加入 HRP 標(biao)(biao)記的(de) ABP 抗(kang)體(ti)，形成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)復合物(wu)(wu)，反復洗(xi)滌后(hou)加底物(wu)(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在過氧(yang)化(hua)物(wu)(wu)酶的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)為(wei)藍色(se)，再用(yong)(yong)硫酸終止反應，轉變(bian)成黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品中(zhong)的(de) ABP含量(liang)呈正相關。采用(yong)(yong)酶標(biao)(biao)儀在 450nm 波長(chang)測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值），根據(ju)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，計算測試樣品中(zhong) ABP 濃度(du)。
小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮(suo)洗滌液 | 20ml×1 瓶(ping) | 7 | 終(zhong)止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑(ji) | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品(pin)稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說(shuo)明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張(zhang) |
6 | 顯(xian)色(se)劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密(mi)封袋 | 1 個 |
小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱(re)30分鐘），微量(liang)加液(ye)器、吸頭、蒸餾水或去(qu)離子水，濾紙。
2. 緩(huan)沖(chong)液(ye)使用：加5ul 的緩(huan)沖(chong)液(ye)于(yu)50ul 的樣(yang)品中，如果樣(yang)品量不(bu)夠(gou)或者不(bu)確定(ding)，緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he)樣(yang)品的混合比例(li)不(bu)要小于(yu)1:10即可。
混(hun)勻，靜置1小時備用(yong)（如果標本是血(xue)清(qing)或者血(xue)漿，此(ci)步(bu)驟忽略）。
3. 洗(xi)液(ye)的配(pei)制(zhi)：按1:100的比(bi)例配(pei)制(zhi)洗(xi)液(ye)備用。
樣品收集、處(chu)理(li)及保存(cun)：
1. 細(xi)胞培養(yang)上(shang)清：適用于檢測(ce)體外(wai)培養(yang)的細(xi)胞分(fen)泌性(xing)成份。用無菌管收集(ji)細(xi)胞上(shang)清液，以(yi)1000×g離心15分(fen)鐘，收集(ji)上(shang)清。
2. 細(xi)胞(bao)：用(yong)PBS反復洗滌細(xi)胞(bao)3次，調整(zheng)細(xi)胞(bao)濃(nong)度達到(dao)104
-106
/ml 左右，通(tong)過(guo)反復(fu)凍融，使細胞破壞(huai)并放出細胞內(nei)成份，或
者細胞超聲(sheng)粉碎，離(li)心取上清液檢測。
3. 血清：在(zai)室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取(qu)上清待測。
4. 血漿：應根據(ju)標本的要求選擇(ze)EDTA 或檸(ning)檬(meng)酸鈉(na)作(zuo)為抗凝劑，混合(he)后靜置10-20 分(fen)(fen)鐘后，以1000×g離心(xin)15分(fen)(fen)鐘，收(shou)集上
清。
5. 體液：包括(kuo)胸腹水、腦脊液，分泌(mi)物等。使用不含(han)熱(re)原(yuan)和內毒素的離心管收集(ji)，以1000×g離心15分鐘，收集(ji)上清。
6. 組織標(biao)本：切取組織標(biao)本，稱取重量0.5mg，加(jia)入500ul 的PBS，用手工(gong)或勻漿器，或超聲破(po)碎(sui)儀將標(biao)本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集(ji)上清進行檢(jian)測。
7. 樣品(pin)中(zhong)不能含有NaN3，因NaN3 抑(yi)制辣根過氧化物酶的(de)（HRP）活性(xing)。
8. 保存(cun)：如(ru)果樣品不能立(li)即檢測，應將其分(fen)裝(zhuang)，-70 ℃保存(cun)，避免反復(fu)冷(leng)凍。保存(cun)過(guo)程中如(ru)出現(xian)沉(chen)淀，應再次離心。血液標
本盡可能的不要使用溶血(xue)或高血(xue)脂血(xue)。如(ru)果血(xue)清中(zhong)含大(da)量(liang)顆粒，檢測(ce)前先(xian)離心或過(guo)濾。不要在(zai)37℃或更高的溫(wen)度加熱解
凍(dong)。應(ying)在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)并確保樣品均勻地(di)充分解凍(dong)。
小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒操作步驟：
1. 取出試劑盒(he)，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分(fen)組：取出(chu) 96 孔(kong)板(ban)，根(gen)據待測樣品數量加上標(biao)準品的數量決定所(suo)需的板(ban)條數，把剩余(yu)的板(ban)條繼(ji)續(xu)冷藏(zang)處理(li)。分(fen)別(bie)設標(biao)準
品(pin)(pin)組（6 個濃度）、空白(bai)孔、待測樣(yang)品(pin)(pin)組。
注：為(wei)減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復(fu)孔。
3. 加(jia)樣：依照標準品的順(shun)序分別加(jia)入(ru) 50ul 的標準品溶(rong)液于空白微孔(kong)中；空白對照孔(kong)加(jia)入(ru) 50ul 的蒸餾(liu)水；其余微孔(kong)中加(jia)入(ru) 50ul
的待測樣本(ben)。
4. 加酶(mei)標(biao)(biao)溶液(ye)：標(biao)(biao)準品(pin)組、待測(ce)樣(yang)本組各孔中(zhong)加入 100ul 的酶(mei)標(biao)(biao)溶液(ye)（空白對照孔除外）。
5. 溫(wen)育：酶標板用封(feng)(feng)板紙密(mi)封(feng)(feng)后，放(fang)入濕盒(he)內(nei)于 37℃恒溫(wen)孵(fu)育 1 小時。
6. 洗板(ban)：用稀釋后的洗滌液(ye)注滿每孔，靜(jing)置 15-30s，充(chong)分清(qing)洗酶(mei)標板(ban) 5 次(ci)，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯(xian)色：各孔加入(ru)顯(xian)色劑 A 液 50ul 后(hou)，再加入(ru)顯(xian)色劑 B 液 50ul。
8. 終(zhong)止：25-37℃下(xia)避(bi)光反(fan)應 10-15 分鐘，加入 50ul 終(zhong)止液。
9. 讀板(ban)：在(zai) 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免(mian)交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制(zhi)加樣速度，避免**孔(kong)(kong)與最后(hou)一(yi)孔(kong)(kong)間的(de)時間間隔過大，否則將會導致不(bu)同的(de)預孵育時間，從而(er)影(ying)響(xiang)
實驗的準(zhun)確性以及重復性。
3. 孵育：嚴(yan)格按照說明書上規定的孵育時間和溫(wen)度進行。
4. 反應時(shi)間的(de)控制(zhi)：加入底物后請(qing)定時(shi)觀察反應孔的(de)顏色(se)變化(hua)，如果顏色(se)較深，請(qing)提前加入終(zhong)止液終(zhong)止反應。
5. 建議(yi)實驗前(qian)預測(ce)樣品(pin)含量，如(ru)樣品(pin)濃度過(guo)高(gao)，應對樣品(pin)進行(xing)稀(xi)釋，計算(suan)結果時乘以相(xiang)應的稀(xi)釋倍數。
6. 建議使用本試劑盒時先(xian)做預實(shi)驗（即(ji)先(xian)做標準曲線(xian)，試用幾(ji)個標本），如果對(dui)本試劑盒有任何(he)疑問，可(ke)和所購經銷(xiao)商聯系(xi)，
如果因(yin)運輸過(guo)程導致試劑盒失效，可(ke)要求調換，但概不承擔產品本身以外的(de)任(ren)何損失。
小鼠γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)酶聯免疫分析定量試劑盒性能
1. 靈敏度(du)(du)：最(zui)小(xiao)的檢測濃(nong)度(du)(du)小(xiao)于1號標準品。稀釋(shi)度(du)(du)的線(xian)性(xing)。樣品線(xian)性(xing)回(hui)歸與(yu)預期濃(nong)度(du)(du)相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不(bu)與其(qi)它(ta)細胞因子反應(ying)。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
結果判斷(duan)與分析
1、儀器值(zhi)：于波長450nm的(de)酶標儀上讀取各孔的(de)OD值(zhi)
2、以吸(xi)光度OD值(zhi)為(wei)縱坐標（Y），相(xiang)(xiang)應的待測物質(zhi)標準(zhun)品濃度為(wei)橫坐標（X），做得相(xiang)(xiang)應的曲線，樣品的待測物質(zhi)含量可根據(ju)其OD值(zhi)由(you)標準(zhun)曲線換(huan)算(suan)出相(xiang)(xiang)應的濃度。
