小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中MTHFD2的含量。
原(yuan)理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)(ti)，實驗時依次在微孔板中加(jia)入樣本(ben)及標準品，并加(jia)入 HRP 標記的(de) ABP 抗(kang)體(ti)(ti)，形成抗(kang)體(ti)(ti)-抗(kang)原-酶(mei)標抗(kang)體(ti)(ti)復合物(wu)(wu)，反復洗滌(di)后(hou)加(jia)底(di)物(wu)(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在過氧化物(wu)(wu)酶(mei)的(de)催(cui)化下轉化為藍(lan)色(se)，再用(yong)硫酸(suan)終止(zhi)反應，轉變成黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和樣品中的(de) ABP含量(liang)呈正相關。采用(yong)酶(mei)標儀在 450nm 波(bo)長測定吸光度(du)（OD 值），根(gen)據標準曲線，計(ji)算測試樣品中 ABP 濃(nong)度(du)。
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒試劑盒組成：
1 | 30 倍(bei)濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶(mei)標(biao)試劑 | 6ml×1瓶(ping) | 8 | 陽性(xing)對(dui)照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性(xing)對(dui)照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說(shuo)明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶(ping) | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋(dai) | 1 個 |
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀(yi)(yi)器(qi)與材料：酶(mei)標儀(yi)(yi)（使用前(qian)預熱(re)30分(fen)鐘(zhong)），微量加(jia)液器(qi)、吸頭、蒸餾水或去離子(zi)水，濾紙(zhi)。
2. 緩(huan)(huan)沖液(ye)使(shi)用：加5ul 的(de)緩(huan)(huan)沖液(ye)于50ul 的(de)樣(yang)(yang)品中，如果樣(yang)(yang)品量不(bu)(bu)夠或者不(bu)(bu)確(que)定，緩(huan)(huan)沖液(ye)和(he)樣(yang)(yang)品的(de)混合比例(li)不(bu)(bu)要小于1:10即可。
混勻，靜置(zhi)1小時備用(yong)（如果標本是血(xue)清或者血(xue)漿，此步(bu)驟忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。
樣(yang)品收集、處理及保存：
1. 細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)上(shang)清(qing)：適用于檢測體外(wai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)的細(xi)胞分(fen)泌性成份。用無菌管收(shou)集細(xi)胞上(shang)清(qing)液，以1000×g離心15分(fen)鐘，收(shou)集上(shang)清(qing)。
2. 細胞：用PBS反復洗滌(di)細胞3次(ci)，調整細胞濃度(du)達到104
-106
/ml 左右，通過反復(fu)凍融，使(shi)細胞破(po)壞并放出細胞內成份，或
者細胞超聲粉碎，離(li)心取上(shang)清(qing)液檢測。
3. 血清(qing)：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清(qing)待測。
4. 血漿：應根據(ju)標本的要求選擇(ze)EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后(hou)(hou)靜置10-20 分(fen)鐘后(hou)(hou)，以(yi)1000×g離心(xin)15分(fen)鐘，收(shou)集上(shang)
清。
5. 體液(ye)：包括胸腹(fu)水(shui)、腦脊(ji)液(ye)，分泌物等。使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原和內毒素的離(li)心管(guan)收集(ji)，以1000×g離(li)心15分鐘，收集(ji)上清(qing)。
6. 組織(zhi)標本：切取(qu)組織(zhi)標本，稱(cheng)取(qu)重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手(shou)工或勻(yun)漿(jiang)器(qi)，或超(chao)聲破碎儀將標本勻(yun)漿(jiang)，以2000-3000
rmp離心20 分(fen)鐘(zhong)，收集(ji)上清(qing)進行檢測。
7. 樣品中(zhong)不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣(la)根過氧化物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活性。
8. 保存：如(ru)果樣品(pin)不能立即檢測(ce)，應(ying)將(jiang)其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷(leng)凍。保存過程中如(ru)出現沉淀，應(ying)再次離心。血液標(biao)
本(ben)盡(jin)可能的不(bu)(bu)要使用(yong)溶(rong)血(xue)(xue)或高血(xue)(xue)脂血(xue)(xue)。如果血(xue)(xue)清中含大量顆粒，檢測前(qian)先離(li)心或過濾。不(bu)(bu)要在(zai)37℃或更高的溫度加熱解(jie)
凍。應(ying)在室(shi)溫下解凍并確保樣品均勻地(di)充分解凍。
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫(wen)（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品(pin)數量(liang)加上標準品(pin)的(de)數量(liang)決定所需的(de)板條數，把(ba)剩余的(de)板條繼續冷藏處理(li)。分別設(she)標準
品組(zu)（6 個濃度）、空白孔、待測(ce)樣(yang)品組(zu)。
注：為減少(shao)實驗誤差(cha)，保證準確性(xing)，建議(yi)設置(zhi)復孔。
3. 加(jia)樣(yang)：依照標準品的(de)順序(xu)分別加(jia)入(ru) 50ul 的(de)標準品溶液(ye)于空白微(wei)孔(kong)中(zhong)；空白對照孔(kong)加(jia)入(ru) 50ul 的(de)蒸(zheng)餾水；其(qi)余微(wei)孔(kong)中(zhong)加(jia)入(ru) 50ul
的(de)待測樣本(ben)。
4. 加酶標(biao)溶液：標(biao)準品組、待測樣(yang)本組各孔中加入 100ul 的酶標(biao)溶液（空白對照孔除(chu)外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于(yu) 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀(xi)釋后的洗(xi)滌液注滿(man)每孔，靜置 15-30s，充分清洗(xi)酶標板 5 次(ci)，用吸水紙徹底拍(pai)干(gan)。
7. 顯(xian)(xian)色：各孔加入顯(xian)(xian)色劑(ji) A 液 50ul 后，再(zai)加入顯(xian)(xian)色劑(ji) B 液 50ul。
8. 終止(zhi)：25-37℃下避光反應(ying) 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終止(zhi)液。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取(qu)各(ge)孔的 OD 值。
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒注意事項：
1. 實驗(yan)操作(zuo)中必須使用一次性吸(xi)頭，避免交叉污染。
2. 加(jia)(jia)樣：加(jia)(jia)樣時，要控制加(jia)(jia)樣速度，避免**孔與最后一孔間的(de)時間間隔過大，否(fou)則將(jiang)會導致(zhi)不同的(de)預孵育時間，從而影響(xiang)
實驗的(de)準確性以及重復性。
3. 孵育：嚴格按照(zhao)說明書上(shang)規定的孵育時間和(he)溫度進行。
4. 反(fan)應(ying)時間的控制：加入底物后請定時觀察反(fan)應(ying)孔的顏(yan)色變化，如果顏(yan)色較深，請提前加入終(zhong)止液終(zhong)止反(fan)應(ying)。
5. 建議實驗(yan)前預(yu)測樣品含量(liang)，如樣品濃度過高(gao)，應對樣品進(jin)行稀釋，計算結果時(shi)乘以相應的稀釋倍數。
6. 建(jian)議使用本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)時先做預(yu)實驗（即先做標準(zhun)曲線，試(shi)(shi)用幾個標本(ben)），如果對(dui)本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)有任何疑問，可和所購經(jing)銷商聯系，
如果因(yin)運輸(shu)過程導致試劑(ji)盒失效，可要求(qiu)調換，但概(gai)不承擔產品本身以外的任何(he)損失。
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU）酶聯免疫分析定量試劑盒性能
1. 靈敏(min)度：最(zui)小(xiao)的檢測濃度小(xiao)于(yu)1號標(biao)準品。稀(xi)釋度的線性(xing)。樣品線性(xing)回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它(ta)細胞因(yin)子反應。
3. 重復性：板內、板間變(bian)異系數(shu)均(jun)小于10%。
結果判(pan)斷(duan)與分析
1、儀器值(zhi)：于波長450nm的(de)酶標儀上(shang)讀(du)取各孔的(de)OD值(zhi)
2、以吸光度OD值為縱(zong)坐標（Y），相(xiang)應(ying)(ying)的(de)(de)待測(ce)物質標準品(pin)濃度為橫坐標（X），做得相(xiang)應(ying)(ying)的(de)(de)曲線，樣品(pin)的(de)(de)待測(ce)物質含量(liang)可根據(ju)其OD值由(you)標準曲線換算出(chu)相(xiang)應(ying)(ying)的(de)(de)濃度。
