小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中MTHFD2的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗時依次在微孔板(ban)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入(ru)樣本及標準品(pin)(pin)，并加(jia)(jia)入(ru) HRP 標記的(de) ABP 抗(kang)(kang)(kang)體，形成(cheng)抗(kang)(kang)(kang)體-抗(kang)(kang)(kang)原-酶(mei)(mei)標抗(kang)(kang)(kang)體復(fu)合物(wu)，反復(fu)洗滌后(hou)加(jia)(jia)底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在過氧化物(wu)酶(mei)(mei)的(de)催化下轉化為藍色(se)，再用硫(liu)酸終(zhong)止(zhi)反應，轉變(bian)成(cheng)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺和樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)的(de) ABP含量呈(cheng)正(zheng)相關。采用酶(mei)(mei)標儀在 450nm 波長測(ce)定吸(xi)光度(du)（OD 值(zhi)），根據標準曲線，計算(suan)測(ce)試(shi)樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong) ABP 濃度(du)。
小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒試劑盒組成：
1 | 30 倍濃(nong)縮(suo)洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液(ye) | 6ml×1 瓶(ping) |
2 | 酶(mei)標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽(yang)性(xing)對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰(yin)性對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
4 | 樣品稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶(ping) | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯色(se)劑 A 液(ye) | 6ml×1 瓶(ping) | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯(xian)色(se)劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個(ge) |
小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器(qi)與(yu)材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器(qi)、吸頭(tou)、蒸餾(liu)水(shui)或去(qu)離子水(shui)，濾紙。
2. 緩沖(chong)(chong)液(ye)使用：加5ul 的緩沖(chong)(chong)液(ye)于50ul 的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖(chong)(chong)液(ye)和樣品的混合比例不要小于1:10即可。
混(hun)勻(yun)，靜(jing)置1小時備(bei)用(yong)（如(ru)果標本是血(xue)清或者血(xue)漿(jiang)，此(ci)步驟忽略）。
3. 洗液的(de)配制：按1:100的(de)比例配制洗液備用。
樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理及保存：
1. 細胞培養上清：適(shi)用于(yu)檢測體外培養的細胞分泌(mi)性成份。用無菌管收(shou)集(ji)細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集(ji)上清。
2. 細胞(bao)：用(yong)PBS反復洗滌(di)細胞(bao)3次，調整細胞(bao)濃度達到(dao)104
-106
/ml 左右，通過反復凍融，使細胞(bao)破壞并放出細胞(bao)內成份，或
者細胞超聲(sheng)粉碎(sui)，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固(gu)，以1000×g離心15分(fen)鐘，取上(shang)清待測。
4. 血漿：應根據(ju)標本(ben)的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉(na)作為抗凝(ning)劑(ji)，混(hun)合后靜置10-20 分(fen)鐘后，以1000×g離心15分(fen)鐘，收(shou)集(ji)上
清。
5. 體(ti)液：包括(kuo)胸腹(fu)水、腦脊液，分(fen)泌物等。使用不含熱原(yuan)和內(nei)毒素的(de)離(li)心管收集，以1000×g離(li)心15分(fen)鐘，收集上清。
6. 組(zu)織(zhi)標本：切取組(zu)織(zhi)標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手(shou)工或勻漿器(qi)，或超聲(sheng)破碎儀(yi)將標本勻漿，以(yi)2000-3000
rmp離心(xin)20 分鐘，收集上清進行(xing)檢(jian)測。
7. 樣(yang)品中不能含(han)有(you)NaN3，因NaN3 抑制辣(la)根過(guo)氧(yang)化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如(ru)果樣品不能立即檢(jian)測，應將其分裝(zhuang)，-70 ℃保存，避免反復冷凍(dong)。保存過(guo)程中如(ru)出現沉淀，應再次離心。血液標
本盡可能的不(bu)要使用(yong)溶血(xue)或高血(xue)脂血(xue)。如果血(xue)清(qing)中含(han)大量(liang)顆粒(li)，檢測前先(xian)離(li)心或過濾。不(bu)要在37℃或更高的溫(wen)度加熱解
凍。應在室溫下解(jie)凍并確保樣品均勻地充(chong)分解(jie)凍。
小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒操作步驟：
1. 取出試劑盒(he)，室(shi)溫（20-25℃）放置 30 分(fen)鐘。
2. 分(fen)組：取出 96 孔板，根據待(dai)測樣品數量加上標(biao)準品的(de)數量決定所需的(de)板條數，把剩余(yu)的(de)板條繼續冷藏(zang)處理。分(fen)別設標(biao)準
品組（6 個濃度）、空白(bai)孔(kong)、待測樣品組。
注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置(zhi)復孔。
3. 加樣(yang)：依照標準品的(de)順(shun)序分別加入 50ul 的(de)標準品溶液于(yu)空白微(wei)孔中；空白對(dui)照孔加入 50ul 的(de)蒸餾水(shui)；其余微(wei)孔中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加(jia)酶標(biao)溶液：標(biao)準品組(zu)、待測樣本(ben)組(zu)各孔中加(jia)入 100ul 的(de)酶標(biao)溶液（空(kong)白對照(zhao)孔除外）。
5. 溫育(yu)：酶標板用封板紙密封后(hou)，放(fang)入濕盒內(nei)于(yu) 37℃恒溫孵育(yu) 1 小時。
6. 洗板：用稀釋(shi)后的(de)洗滌液注滿每(mei)孔，靜置 15-30s，充分(fen)清洗酶標板 5 次，用吸(xi)水紙(zhi)徹底拍(pai)干。
7. 顯色(se)：各(ge)孔加入顯色(se)劑 A 液(ye)(ye) 50ul 后，再加入顯色(se)劑 B 液(ye)(ye) 50ul。
8. 終(zhong)(zhong)止：25-37℃下避(bi)光反應 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終(zhong)(zhong)止液。
9. 讀(du)板：在 450nm 波長讀(du)取各孔的 OD 值(zhi)。
小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭(tou)，避免(mian)交叉污(wu)染(ran)。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)時(shi)，要(yao)控制加樣(yang)速度，避免**孔與最后一孔間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔過大，否則(ze)將(jiang)會導(dao)致不同的預(yu)孵育時(shi)間(jian)，從而影響(xiang)
實驗的準確性(xing)以及(ji)重復性(xing)。
3. 孵(fu)育：嚴格(ge)按照說明書上規定的孵(fu)育時(shi)間和溫度進行。
4. 反應(ying)(ying)時間的控制：加(jia)入(ru)底物后請定時觀察反應(ying)(ying)孔(kong)的顏色變化，如果顏色較深，請提前加(jia)入(ru)終(zhong)止液終(zhong)止反應(ying)(ying)。
5. 建議實驗前預測(ce)樣品含量，如樣品濃度過高(gao)，應對樣品進行稀釋，計算結果時(shi)乘(cheng)以相應的(de)稀釋倍數。
6. 建議使用(yong)本試(shi)劑盒時先(xian)(xian)做(zuo)預(yu)實(shi)驗(yan)（即先(xian)(xian)做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線，試(shi)用(yong)幾個標本），如(ru)果對本試(shi)劑盒有任(ren)何疑(yi)問，可和所購經銷商(shang)聯(lian)系，
如果因運輸過程導致(zhi)試劑盒失(shi)效，可要求調換，但概不承(cheng)擔產品本身以(yi)外的(de)任何損失(shi)。
小鼠血紅蛋白(Hb)酶聯免疫分析定量試劑盒性能
1. 靈(ling)敏(min)度：最小的(de)檢測濃(nong)(nong)度小于(yu)1號標準品(pin)。稀釋度的(de)線(xian)性。樣(yang)品(pin)線(xian)性回歸與預期濃(nong)(nong)度相關系數R值為0.990。
2. 特異性(xing)：不(bu)與其它細胞因子反應(ying)。
3. 重(zhong)復性：板內、板間變(bian)異系數均小(xiao)于10%。
結果判斷與分析
1、儀器值(zhi)：于波長450nm的酶標儀上讀取各(ge)孔的OD值(zhi)
2、以吸(xi)光度OD值為縱坐(zuo)標（Y），相(xiang)應的(de)待測物(wu)質標準品濃度為橫(heng)坐(zuo)標（X），做得相(xiang)應的(de)曲線，樣品的(de)待測物(wu)質含量可根(gen)據其OD值由標準曲線換算出相(xiang)應的(de)濃度。
