小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中MTHFD2的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)(ti)，實驗時依次在微孔板中加入(ru)樣(yang)本及標(biao)準品，并加入(ru) HRP 標(biao)記(ji)的(de) ABP 抗(kang)體(ti)(ti)，形成(cheng)(cheng)抗(kang)體(ti)(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)抗(kang)體(ti)(ti)復(fu)(fu)合(he)物(wu)，反復(fu)(fu)洗滌(di)后加底物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)催化(hua)下轉化(hua)為(wei)藍色(se)，再用硫酸終止反應，轉變成(cheng)(cheng)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣(yang)品中的(de) ABP含量(liang)呈正相關。采用酶標(biao)儀在 450nm 波(bo)長測定(ding)吸光度（OD 值），根據(ju)標(biao)準曲線，計算測試樣(yang)品中 ABP 濃度。
小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒盒試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮(suo)洗(xi)滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶(mei)標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性(xing)對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說(shuo)明書 | 1 份 |
5 | 顯色(se)劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封(feng)板(ban)膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑(ji) B 液(ye) | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用前(qian)預熱30分鐘），微(wei)量加液器、吸頭、蒸餾(liu)水(shui)(shui)或去(qu)離(li)子水(shui)(shui)，濾紙(zhi)。
2. 緩(huan)沖液使用：加5ul 的(de)緩(huan)沖液于50ul 的(de)樣(yang)品中，如(ru)果樣(yang)品量(liang)不夠或者不確定，緩(huan)沖液和樣(yang)品的(de)混(hun)合(he)比例不要小于1:10即可(ke)。
混(hun)勻，靜置1小時(shi)備(bei)用（如果標本是血(xue)清(qing)或者血(xue)漿，此步驟忽(hu)略）。
3. 洗液(ye)的(de)配制：按1:100的(de)比例配制洗液(ye)備(bei)用。
樣品收集、處理及保存：
1. 細胞(bao)培(pei)養上(shang)清(qing)(qing)：適用于檢測體外培(pei)養的細胞(bao)分泌性成份。用無菌管收集細胞(bao)上(shang)清(qing)(qing)液，以(yi)1000×g離心(xin)15分鐘，收集上(shang)清(qing)(qing)。
2. 細(xi)胞：用PBS反復(fu)洗滌(di)細(xi)胞3次，調整細(xi)胞濃度達到104
-106
/ml 左右，通過反復凍融(rong)，使細(xi)胞破壞并放出細(xi)胞內(nei)成份，或
者細胞超聲粉碎，離(li)心取上清(qing)液檢(jian)測。
3. 血清(qing)：在室溫(wen)下(xia)，血液自然凝(ning)固，以1000×g離心15分鐘，取上清(qing)待測。
4. 血漿：應根據標本的要(yao)求選擇EDTA 或檸檬酸(suan)鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以(yi)1000×g離心15分鐘，收(shou)集(ji)上
清。
5. 體(ti)液：包(bao)括胸腹(fu)水(shui)、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離(li)心(xin)管收(shou)集，以1000×g離(li)心(xin)15分鐘，收(shou)集上清。
6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加(jia)入500ul 的PBS，用手(shou)工或(huo)勻(yun)漿器，或(huo)超聲破碎儀將標本勻(yun)漿，以2000-3000
rmp離(li)心20 分(fen)鐘，收(shou)集上清(qing)進行檢測。
7. 樣品(pin)中(zhong)不能含有(you)NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
8. 保(bao)存(cun)(cun)：如(ru)果樣品不能立即(ji)檢測，應(ying)將(jiang)其(qi)分裝，-70 ℃保(bao)存(cun)(cun)，避免反(fan)復冷凍。保(bao)存(cun)(cun)過程(cheng)中如(ru)出現(xian)沉淀(dian)，應(ying)再次離心。血液(ye)標
本(ben)盡可能的不要(yao)(yao)使用溶血或(huo)高血脂(zhi)血。如果血清中含(han)大量顆粒，檢測前先離心或(huo)過濾。不要(yao)(yao)在37℃或(huo)更高的溫度加(jia)熱(re)解
凍(dong)。應在室溫下(xia)解(jie)凍(dong)并(bing)確保樣品均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。
小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放(fang)置 30 分鐘。
2. 分(fen)組：取(qu)出 96 孔(kong)板，根據待測(ce)樣品數(shu)(shu)量加(jia)上標(biao)準(zhun)品的數(shu)(shu)量決(jue)定所需的板條(tiao)數(shu)(shu)，把剩余的板條(tiao)繼續(xu)冷藏處理。分(fen)別設標(biao)準(zhun)
品(pin)組（6 個濃度(du)）、空白孔、待(dai)測樣品(pin)組。
注：為減少實(shi)驗誤差，保證準確(que)性，建議設置復孔。
3. 加(jia)樣：依照(zhao)標準品的順(shun)序(xu)分(fen)別加(jia)入(ru) 50ul 的標準品溶液于空白微(wei)孔中(zhong)；空白對照(zhao)孔加(jia)入(ru) 50ul 的蒸餾(liu)水(shui)；其余微(wei)孔中(zhong)加(jia)入(ru) 50ul
的待測(ce)樣(yang)本(ben)。
4. 加(jia)酶(mei)標溶液：標準品組、待測樣本組各孔(kong)(kong)中加(jia)入 100ul 的酶(mei)標溶液（空白對照孔(kong)(kong)除外(wai)）。
5. 溫(wen)育：酶標板(ban)用封板(ban)紙密封后，放(fang)入濕(shi)盒(he)內(nei)于 37℃恒溫(wen)孵育 1 小時(shi)。
6. 洗(xi)板(ban)：用稀釋后的(de)洗(xi)滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗(xi)酶標板(ban) 5 次，用吸水紙徹底拍(pai)干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm 波長(chang)讀取各孔的(de) OD 值。
小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒注意事項：
1. 實驗(yan)操作(zuo)中必(bi)須使用一次性吸頭(tou)，避免交叉污(wu)染(ran)。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)時(shi)(shi)，要控制加樣(yang)速度，避免(mian)**孔與最后一孔間的時(shi)(shi)間間隔過(guo)大(da)，否(fou)則(ze)將會導致不同的預孵育(yu)時(shi)(shi)間，從而影(ying)響
實驗的準確性以及重復性。
3. 孵(fu)育：嚴格按照說明書上(shang)規定(ding)的孵(fu)育時間和(he)溫度(du)進行。
4. 反(fan)應(ying)時間的控制：加入(ru)底物(wu)后請(qing)定時觀察反(fan)應(ying)孔的顏色(se)變(bian)化，如果(guo)顏色(se)較深，請(qing)提(ti)前(qian)加入(ru)終止(zhi)(zhi)液終止(zhi)(zhi)反(fan)應(ying)。
5. 建議(yi)實驗前預(yu)測樣品(pin)含(han)量，如樣品(pin)濃度過高，應對樣品(pin)進行(xing)稀(xi)釋，計(ji)算(suan)結果時乘(cheng)以相應的(de)稀(xi)釋倍數。
6. 建議使用(yong)本(ben)試劑(ji)盒時先做預實(shi)驗（即先做標準曲線(xian)，試用(yong)幾個標本(ben)），如果對本(ben)試劑(ji)盒有任何疑問(wen)，可和所購經銷商(shang)聯(lian)系，
如果因運輸過程導致試劑盒失效，可(ke)要(yao)求調換，但概不(bu)承擔(dan)產品本身以外的任何損(sun)失。
小鼠甘露糖(Mannose)ELISA檢測試劑盒性能
1. 靈敏度：最(zui)小(xiao)的(de)檢(jian)測濃度小(xiao)于1號標(biao)準(zhun)品(pin)。稀(xi)釋度的(de)線(xian)性。樣品(pin)線(xian)性回歸與預期(qi)濃度相(xiang)關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(ying)。
3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間變異系(xi)數均小(xiao)于(yu)10%。
結(jie)果判斷(duan)與分析
1、儀(yi)器值：于波長450nm的酶標儀(yi)上讀(du)取(qu)各孔的OD值
2、以吸光度OD值(zhi)為縱坐(zuo)標（Y），相應的待(dai)測物質標準品(pin)濃度為橫(heng)坐(zuo)標（X），做得相應的曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的待(dai)測物質含量(liang)可根據其OD值(zhi)由標準曲線(xian)換算出相應的濃度。
