TSST-1 Elisa Kit用途：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢(jian)測細胞液(ye)、體(ti)液(ye)、組(zu)織、血(xue)清、血(xue)漿等標(biao)本中TSST-1的含量。
原理：
采用雙(shuang)抗體夾心法測定TSST-1水平。用純化的TSST-1抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗時依次在(zai)微孔板中(zhong)加(jia)(jia)入樣本及(ji)標準品，并加(jia)(jia)入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
TSST-1 Elisa Kit試(shi)劑盒組成：
1 | 30 倍(bei)濃縮(suo)洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶(ping) |
2 | 酶標試劑(ji) | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被(bei)板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣(yang)品(pin)稀釋液 | 6ml×1 瓶(ping) | 10 | 說(shuo)明書 | 1 份 |
5 | 顯色(se)劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張(zhang) |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
TSST-1 Elisa Kit實驗材料與試(shi)劑配制：
1. 儀(yi)器與材料：酶標儀(yi)（使(shi)用前預熱30分(fen)鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離(li)子水，濾紙。
2. 緩沖液(ye)使(shi)用：加5ul 的(de)(de)緩沖液(ye)于50ul 的(de)(de)樣品中，如果樣品量不(bu)夠或(huo)者不(bu)確定，緩沖液(ye)和樣品的(de)(de)混合比例(li)不(bu)要小(xiao)于1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗(xi)液的(de)配制：按1:100的(de)比例配制洗(xi)液備(bei)用。
樣品收集、處理及保(bao)存：
1. 細(xi)胞培養上(shang)清：適用于檢測體外(wai)培養的細(xi)胞分泌性(xing)成份。用無菌管收(shou)(shou)集(ji)細(xi)胞上(shang)清液，以1000×g離(li)心15分鐘，收(shou)(shou)集(ji)上(shang)清。
2. 細(xi)胞：用PBS反復洗滌細(xi)胞3次，調整細(xi)胞濃度達到(dao)104
-106
/ml 左(zuo)右，通過反復(fu)凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或
者細胞(bao)超(chao)聲粉碎，離心取(qu)上清液檢(jian)測。
3. 血(xue)清：在室(shi)溫下，血(xue)液自然(ran)凝固，以(yi)1000×g離(li)心15分鐘，取上清待(dai)測。
4. 血漿：應根據標(biao)本(ben)的要求選擇(ze)EDTA 或檸(ning)檬酸鈉作為抗凝劑(ji)，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離(li)心15分鐘，收(shou)集上
清。
5. 體液(ye)：包括胸腹水(shui)、腦(nao)脊液(ye)，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離(li)心管收集，以1000×g離(li)心15分鐘，收集上清。
6. 組(zu)(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)：切(qie)取組(zu)(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)，稱(cheng)取重量0.5mg，加(jia)入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀(yi)將標(biao)本(ben)勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分(fen)鐘，收集上(shang)清進(jin)行檢測。
7. 樣品中不(bu)能(neng)含(han)有NaN3，因NaN3 抑(yi)制辣根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。
8. 保(bao)存(cun)：如果樣品不能立即(ji)檢測，應將(jiang)其分裝，-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免反(fan)復冷凍。保(bao)存(cun)過程中如出(chu)現沉淀，應再次離心。血液標
本(ben)盡可能的不要(yao)使(shi)用溶血或高血脂(zhi)血。如(ru)果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾(lv)。不要(yao)在(zai)37℃或更高的溫度加熱解
凍。應在室溫(wen)下解凍并確(que)保樣(yang)品均勻(yun)地充分(fen)解凍。
TSST-1 Elisa Kit操(cao)作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘(zhong)。
2. 分組：取出 96 孔板(ban)，根(gen)據(ju)待測樣品(pin)數量加上標準(zhun)品(pin)的數量決定所需(xu)的板(ban)條(tiao)數，把剩(sheng)余的板(ban)條(tiao)繼續冷藏(zang)處理。分別設(she)標準(zhun)
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實驗誤差，保(bao)證準確性，建議設置復孔。
3. 加(jia)(jia)(jia)樣：依照標準(zhun)品(pin)的(de)順序分別(bie)加(jia)(jia)(jia)入(ru) 50ul 的(de)標準(zhun)品(pin)溶液(ye)于空(kong)白微(wei)孔(kong)中；空(kong)白對照孔(kong)加(jia)(jia)(jia)入(ru) 50ul 的(de)蒸(zheng)餾水(shui)；其(qi)余微(wei)孔(kong)中加(jia)(jia)(jia)入(ru) 50ul
的待測樣(yang)本。
4. 加(jia)酶標(biao)溶液：標(biao)準品組、待測樣(yang)本組各孔中加(jia)入 100ul 的酶標(biao)溶液（空(kong)白對照孔除外）。
5. 溫育(yu)：酶標板用封板紙密(mi)封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵(fu)育(yu) 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀釋后的(de)洗(xi)滌液注(zhu)滿每孔，靜(jing)置 15-30s，充分清洗(xi)酶標板 5 次，用吸水紙(zhi)徹(che)底拍干。
7. 顯(xian)色(se)：各孔加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji) A 液(ye) 50ul 后，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji) B 液(ye) 50ul。
8. 終(zhong)止：25-37℃下避光(guang)反(fan)應 10-15 分鐘，加入(ru) 50ul 終(zhong)止液。
9. 讀(du)板：在 450nm 波(bo)長(chang)讀(du)取各孔的 OD 值。
TSST-1 Elisa Kit注意事項：
1. 實驗(yan)操作中必須(xu)使用一次性吸(xi)頭，避(bi)免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免**孔(kong)與最(zui)后一孔(kong)間的時間間隔過大(da)，否則將(jiang)會導致不同(tong)的預(yu)孵育時間，從而影響(xiang)
實驗的準(zhun)確(que)性以及重復性。
3. 孵育：嚴格(ge)按照說明書上(shang)規(gui)定的(de)孵育時間和溫度進行。
4. 反應時間的控制：加入底(di)物后請(qing)定(ding)時觀察反應孔(kong)的顏色變化，如(ru)果顏色較(jiao)深(shen)，請(qing)提前加入終止液終止反應。
5. 建議實驗前(qian)預測樣品(pin)(pin)(pin)含(han)量，如樣品(pin)(pin)(pin)濃度過(guo)高，應對樣品(pin)(pin)(pin)進行稀(xi)釋，計算結果時乘以相(xiang)應的(de)稀(xi)釋倍數。
6. 建(jian)議使用本試劑盒時先(xian)做預實驗（即(ji)先(xian)做標(biao)準曲線，試用幾個標(biao)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和(he)所購經銷(xiao)商聯系，
如果因(yin)運輸過程導致試(shi)劑盒失效(xiao)，可要(yao)求調換，但概(gai)不(bu)承擔產品本身以外的任何損失。
TSST-1 Elisa Kit性能(neng)
1. 靈(ling)敏(min)度(du)：最(zui)小的(de)檢測(ce)濃度(du)小于(yu)1號標(biao)準品。稀釋度(du)的(de)線(xian)(xian)性。樣品線(xian)(xian)性回歸與預期濃度(du)相關系數R值為0.990。
2. 特(te)異性：不與其(qi)它細胞因(yin)子反應。
3. 重復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異系數均(jun)小于10%。
結果(guo)判(pan)斷與分析
1、儀(yi)(yi)器值：于波長450nm的酶標儀(yi)(yi)上讀取(qu)各孔的OD值
2、以吸光度(du)OD值為縱坐標(biao)(biao)（Y），相應的待測(ce)物質標(biao)(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)為橫坐標(biao)(biao)（X），做得相應的曲線，樣品(pin)的待測(ce)物質含量可(ke)根(gen)據(ju)其(qi)OD值由標(biao)(biao)準曲線換算(suan)出相應的濃(nong)度(du)。
