β Manase Elisa Kit 用途：
本(ben)試(shi)劑盒(he)僅供科研使用，定量檢(jian)測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biao)本(ben)中β Manase 的含量。
原理：
采用(yong)雙抗體(ti)夾心法測定β Manase 水平。用純化的β Manase 抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗時依次在(zai)微(wei)孔板中加入樣(yang)本及標(biao)準(zhun)品，并加入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
β Manase Elisa Kit 試劑盒組成(cheng)：
1 | 30 倍(bei)濃(nong)縮洗滌液(ye) | 20ml×1 瓶 | 7 | 終(zhong)止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶(mei)標包(bao)被板 | 12 孔(kong)×8 條(tiao) | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯(xian)色劑 A 液(ye) | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑(ji) B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封(feng)袋 | 1 個 |
β Manase Elisa Kit 實驗材料與(yu)試(shi)劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用(yong)前預熱(re)30分(fen)鐘(zhong)），微量加液器、吸(xi)頭、蒸餾水或(huo)去離子水，濾紙。
2. 緩(huan)(huan)沖液(ye)使用：加5ul 的緩(huan)(huan)沖液(ye)于50ul 的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩(huan)(huan)沖液(ye)和樣品的混合比例不要小于1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗(xi)液的配(pei)制(zhi)：按1:100的比例(li)配(pei)制(zhi)洗(xi)液備用。
樣品收集、處理及(ji)保存：
1. 細胞培養(yang)上(shang)清：適用于檢測(ce)體外培養(yang)的細胞分泌(mi)性(xing)成份。用無菌管收(shou)集細胞上(shang)清液(ye)，以(yi)1000×g離(li)心15分鐘，收(shou)集上(shang)清。
2. 細胞(bao)(bao)：用PBS反(fan)復洗(xi)滌細胞(bao)(bao)3次，調整細胞(bao)(bao)濃度達(da)到104
-106
/ml 左右，通過反復凍融，使細(xi)胞(bao)破(po)壞并(bing)放出細(xi)胞(bao)內(nei)成份，或
者細胞超(chao)聲(sheng)粉碎，離心取上(shang)清(qing)液(ye)檢(jian)測。
3. 血清：在室溫(wen)下，血液自然凝固，以(yi)1000×g離(li)心15分(fen)鐘，取上清待測。
4. 血漿(jiang)：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為(wei)抗凝劑，混(hun)合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離(li)心15分鐘，收集(ji)上
清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使(shi)用不含熱原和內毒素的離心管收(shou)集，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集上(shang)清。
6. 組(zu)織標(biao)本：切取組(zu)織標(biao)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿(jiang)器，或超聲破碎儀將(jiang)標(biao)本勻漿(jiang)，以2000-3000
rmp離心(xin)20 分鐘(zhong)，收集上清進行檢(jian)測(ce)。
7. 樣品中(zhong)不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根(gen)過氧化(hua)物酶的(de)（HRP）活性(xing)。
8. 保存：如(ru)果樣(yang)品不能立即(ji)檢測，應(ying)將其分裝，-70 ℃保存，避(bi)免(mian)反復(fu)冷凍。保存過程(cheng)中如(ru)出(chu)現(xian)沉(chen)淀，應(ying)再次離心。血(xue)液標
本盡可(ke)能的(de)不要(yao)使用溶血或高血脂(zhi)血。如果血清中(zhong)含大量顆粒，檢(jian)測(ce)前先離心或過濾。不要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解
凍(dong)。應在室(shi)溫下(xia)解凍(dong)并確保樣品(pin)均勻地充(chong)分解凍(dong)。
β Manase Elisa Kit 操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分(fen)組(zu)：取出 96 孔(kong)板，根(gen)據待測樣品數量(liang)加上標準品的(de)數量(liang)決定(ding)所需的(de)板條(tiao)數，把(ba)剩(sheng)余的(de)板條(tiao)繼續(xu)冷藏處理。分(fen)別設標準
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實驗(yan)誤差，保證(zheng)準確性(xing)，建議設(she)置復孔。
3. 加(jia)(jia)樣：依照標準(zhun)品的(de)(de)順序分別(bie)加(jia)(jia)入 50ul 的(de)(de)標準(zhun)品溶(rong)液于(yu)空白微(wei)孔(kong)中；空白對照孔(kong)加(jia)(jia)入 50ul 的(de)(de)蒸餾水；其余微(wei)孔(kong)中加(jia)(jia)入 50ul
的待(dai)測樣本。
4. 加酶(mei)標溶液：標準品(pin)組、待測樣本組各孔(kong)中加入 100ul 的酶(mei)標溶液（空白對照孔(kong)除外）。
5. 溫育(yu)(yu)：酶標板用封(feng)板紙密封(feng)后，放入濕(shi)盒(he)內于(yu) 37℃恒溫孵育(yu)(yu) 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀釋(shi)后(hou)的洗(xi)滌液(ye)注滿(man)每孔，靜置 15-30s，充分清(qing)洗(xi)酶(mei)標板 5 次，用吸水(shui)紙徹底拍干。
7. 顯(xian)色：各孔(kong)加入顯(xian)色劑 A 液(ye) 50ul 后，再加入顯(xian)色劑 B 液(ye) 50ul。
8. 終止：25-37℃下避(bi)光反應 10-15 分鐘，加入(ru) 50ul 終止液。
9. 讀板(ban)：在(zai) 450nm 波長讀取各(ge)孔的 OD 值。
β Manase Elisa Kit 注意事項：
1. 實驗操作中(zhong)必須(xu)使用一次性(xing)吸頭，避免交叉污染(ran)。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速(su)度，避免**孔(kong)與(yu)最后(hou)一孔(kong)間的(de)時間間隔過(guo)大，否則將(jiang)會導致不同的(de)預孵(fu)育時間，從而影響
實驗的準確性以(yi)及(ji)重復性。
3. 孵(fu)(fu)育(yu)：嚴格按照說(shuo)明書(shu)上規定(ding)的孵(fu)(fu)育(yu)時間和溫度(du)進行。
4. 反(fan)(fan)應(ying)時(shi)間的控制：加(jia)入(ru)底物后(hou)請定時(shi)觀察反(fan)(fan)應(ying)孔的顏色變化，如果顏色較深(shen)，請提前加(jia)入(ru)終(zhong)(zhong)止液終(zhong)(zhong)止反(fan)(fan)應(ying)。
5. 建議實驗(yan)前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀(xi)釋，計算結果時乘(cheng)以相應的稀(xi)釋倍數。
6. 建議使用本(ben)試劑盒時先做預實驗（即先做標準(zhun)曲線，試用幾個(ge)標本(ben)），如果(guo)對本(ben)試劑盒有任(ren)何疑問(wen)，可和所購經銷(xiao)商聯系(xi)，
如果(guo)因運輸過(guo)程導致試劑盒(he)失(shi)(shi)效，可要求調換，但概不承(cheng)擔產品本身以外(wai)的任何損失(shi)(shi)。
β Manase Elisa Kit 性能
1. 靈敏(min)度：最小的檢測濃度小于(yu)1號標準品(pin)(pin)。稀(xi)釋度的線性。樣品(pin)(pin)線性回歸與(yu)預(yu)期濃度相關系數R值(zhi)為0.990。
2. 特(te)異性：不與其它細(xi)胞因子反(fan)應。
3. 重復性(xing)：板內、板間變異(yi)系(xi)數均小于10%。
結果(guo)判斷(duan)與分析(xi)
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以(yi)吸光度OD值(zhi)為縱坐標（Y），相(xiang)應(ying)的(de)(de)待(dai)測(ce)物質標準(zhun)品濃度為橫(heng)坐標（X），做得(de)相(xiang)應(ying)的(de)(de)曲線，樣品的(de)(de)待(dai)測(ce)物質含(han)量可(ke)根據其OD值(zhi)由標準(zhun)曲線換算出相(xiang)應(ying)的(de)(de)濃度。
