βGAL Elisa Kit 用途(tu)：
本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞(bao)液(ye)、體液(ye)、組(zu)織、血(xue)清(qing)、血(xue)漿等標本中βGAL 的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法測(ce)定βGAL 水平。用純化的βGAL 抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗時依次在(zai)微(wei)孔板(ban)中(zhong)加入樣本及標準品，并加入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
βGAL Elisa Kit 試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮洗滌(di)液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶(ping) |
2 | 酶標試劑(ji) | 6ml×1瓶 | 8 | 陽(yang)性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶(mei)標包被(bei)板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯(xian)色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封(feng)板膜 | 2 張 |
6 | 顯(xian)色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
βGAL Elisa Kit 實驗(yan)材料與試劑配制(zhi)：
1. 儀(yi)器與材(cai)料：酶標儀(yi)（使用前預(yu)熱30分(fen)鐘(zhong)），微量(liang)加液器、吸頭、蒸(zheng)餾水或(huo)去離(li)子水，濾紙。
2. 緩沖液(ye)使(shi)用：加5ul 的(de)緩沖液(ye)于(yu)50ul 的(de)樣品中，如果(guo)樣品量不(bu)夠或者(zhe)不(bu)確定，緩沖液(ye)和樣品的(de)混(hun)合比(bi)例不(bu)要小于(yu)1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配制(zhi)：按1:100的比例配制(zhi)洗液備用。
樣品收集、處理及保(bao)存：
1. 細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)：適用(yong)(yong)于(yu)檢測體(ti)外培(pei)養(yang)的細(xi)(xi)胞分(fen)泌(mi)性成(cheng)份。用(yong)(yong)無菌管收集細(xi)(xi)胞上(shang)清(qing)液，以1000×g離心15分(fen)鐘，收集上(shang)清(qing)。
2. 細(xi)胞(bao)：用PBS反復洗滌細(xi)胞(bao)3次(ci)，調整細(xi)胞(bao)濃度達到104
-106
/ml 左(zuo)右，通(tong)過反(fan)復(fu)凍(dong)融，使細胞(bao)(bao)破壞并放出細胞(bao)(bao)內成份，或
者細(xi)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(ce)。
3. 血清：在室溫下(xia)，血液自然凝固，以1000×g離(li)心15分鐘(zhong)，取上清待(dai)測。
4. 血漿(jiang)：應根據(ju)標本(ben)的要求(qiu)選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝(ning)劑，混(hun)合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心(xin)15分鐘，收集上
清。
5. 體液(ye)：包(bao)括胸(xiong)腹水(shui)、腦(nao)脊(ji)液(ye)，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收(shou)集，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集上清。
6. 組織(zhi)標(biao)本(ben)：切取組織(zhi)標(biao)本(ben)，稱取重量(liang)0.5mg，加入(ru)500ul 的PBS，用手工或勻(yun)漿器，或超聲破碎儀將標(biao)本(ben)勻(yun)漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集(ji)上清進(jin)行(xing)檢(jian)測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧(yang)化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如(ru)果樣(yang)品不能立即檢測，應(ying)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中(zhong)如(ru)出現沉淀，應(ying)再(zai)次離心。血液標
本盡可(ke)能的不(bu)要使用溶血或高血脂血。如果血清中(zhong)含大量顆粒，檢測(ce)前先離心(xin)或過濾(lv)。不(bu)要在(zai)37℃或更高的溫度加熱解
凍。應(ying)在室溫下解(jie)凍并確(que)保樣品均勻地充分解(jie)凍。
βGAL Elisa Kit 操作步驟：
1. 取出試劑(ji)盒，室溫（20-25℃）放置(zhi) 30 分鐘。
2. 分組：取出(chu) 96 孔(kong)板(ban)，根(gen)據待測樣品數量加上標準品的(de)數量決(jue)定所需的(de)板(ban)條數，把剩余(yu)的(de)板(ban)條繼續(xu)冷藏處(chu)理(li)。分別設(she)標準
品組(zu)（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實驗誤(wu)差，保證準確性，建議設置復(fu)孔。
3. 加(jia)樣：依照標準(zhun)品(pin)的(de)順序(xu)分別加(jia)入 50ul 的(de)標準(zhun)品(pin)溶液于空(kong)白(bai)微孔(kong)中；空(kong)白(bai)對照孔(kong)加(jia)入 50ul 的(de)蒸餾水；其余微孔(kong)中加(jia)入 50ul
的待(dai)測樣本。
4. 加酶(mei)標(biao)溶(rong)液：標(biao)準品組、待測樣本(ben)組各孔(kong)中加入(ru) 100ul 的酶(mei)標(biao)溶(rong)液（空(kong)白對照孔(kong)除外(wai)）。
5. 溫育：酶標板(ban)用封板(ban)紙密封后(hou)，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀(xi)釋后的洗滌液注滿每孔(kong)，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸(xi)水紙(zhi)徹底拍干(gan)。
7. 顯(xian)色(se)：各(ge)孔加(jia)入顯(xian)色(se)劑 A 液(ye) 50ul 后，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑 B 液(ye) 50ul。
8. 終止(zhi)(zhi)：25-37℃下避光反應(ying) 10-15 分(fen)鐘，加入 50ul 終止(zhi)(zhi)液。
9. 讀板：在 450nm 波(bo)長(chang)讀取各孔(kong)的 OD 值。
βGAL Elisa Kit 注意(yi)事(shi)項：
1. 實(shi)驗(yan)操作(zuo)中(zhong)必須(xu)使用一(yi)次性吸頭(tou)，避(bi)免交叉污染(ran)。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)時(shi)，要(yao)控制加樣(yang)速度，避免**孔與最后一孔間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔過大，否則將會(hui)導(dao)致不同的預孵育時(shi)間(jian)，從而影(ying)響
實驗的(de)準確(que)性以及重復性。
3. 孵育：嚴格按照說明書(shu)上(shang)規定的孵育時(shi)間(jian)和溫度進行。
4. 反(fan)(fan)應時(shi)間的(de)控制：加入底物后請定時(shi)觀(guan)察反(fan)(fan)應孔(kong)的(de)顏色(se)變化，如果顏色(se)較深，請提前加入終止液終止反(fan)(fan)應。
5. 建議(yi)實(shi)驗(yan)前(qian)預(yu)測樣(yang)品含量，如樣(yang)品濃度過高，應對樣(yang)品進行稀釋，計算結果時乘(cheng)以相應的稀釋倍數。
6. 建(jian)議使用本試(shi)劑(ji)盒(he)時(shi)先(xian)做預(yu)實驗（即先(xian)做標準曲線，試(shi)用幾個標本），如果對本試(shi)劑(ji)盒(he)有任何疑問，可和所購經(jing)銷商聯系，
如果因運輸過程導致(zhi)試劑盒失(shi)效，可(ke)要求調(diao)換，但(dan)概不承擔產品本身以外的(de)任何(he)損失(shi)。
βGAL Elisa Kit 性(xing)能
1. 靈敏度(du)：最小(xiao)的(de)檢測濃(nong)度(du)小(xiao)于1號標準品。稀(xi)釋度(du)的(de)線性。樣品線性回歸與預期濃(nong)度(du)相關系數R值為0.990。
2. 特異性(xing)：不與其它細胞因子反(fan)應。
3. 重(zhong)復性(xing)：板內、板間(jian)變異系(xi)數(shu)均小于10%。
結果判斷與(yu)分析
1、儀(yi)器值：于波長450nm的酶標儀(yi)上(shang)讀取各孔的OD值
2、以吸光(guang)度OD值為縱坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應的待測物質標(biao)準品(pin)濃度為橫坐(zuo)標(biao)（X），做得(de)相(xiang)應的曲(qu)線，樣品(pin)的待測物質含量可根據其OD值由標(biao)準曲(qu)線換算出相(xiang)應的濃度。
