β-Hex A Elisa Kit 用途：
本(ben)試劑盒僅供(gong)科研(yan)使用，定量檢(jian)測細胞液(ye)、體液(ye)、組織、血清、血漿(jiang)等(deng)標本(ben)中β-Hex A 的含量。
原理(li)：
采用雙(shuang)抗體夾心法(fa)測定(ding)β-Hex A 水平。用純化的β-Hex A 抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗(yan)時(shi)依次在微孔(kong)板中加入樣本及標準(zhun)品(pin)，并加入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
β-Hex A Elisa Kit 試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮洗滌液(ye) | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止(zhi)液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板(ban) | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀(xi)釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份(fen) |
5 | 顯色劑(ji) A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶(ping) | 12 | 密(mi)封袋 | 1 個 |
β-Hex A Elisa Kit 實驗(yan)材料與試劑配制：
1. 儀器(qi)與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量(liang)加液器(qi)、吸頭、蒸餾水或去(qu)離子水，濾(lv)紙。
2. 緩(huan)沖(chong)液(ye)使用：加(jia)5ul 的緩(huan)沖(chong)液(ye)于50ul 的樣(yang)品中，如果樣(yang)品量(liang)不夠或者不確定(ding)，緩(huan)沖(chong)液(ye)和樣(yang)品的混合比例不要小(xiao)于1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液(ye)的配制：按1:100的比例配制洗液(ye)備(bei)用。
樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理及保存(cun)：
1. 細(xi)胞(bao)培(pei)養上清：適用于(yu)檢(jian)測體外(wai)培(pei)養的細(xi)胞(bao)分泌性成份。用無(wu)菌管收集(ji)細(xi)胞(bao)上清液，以1000×g離心15分鐘，收集(ji)上清。
2. 細(xi)胞：用PBS反復(fu)洗(xi)滌細(xi)胞3次，調(diao)整(zheng)細(xi)胞濃度達到104
-106
/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破(po)壞并(bing)放出細胞內成份，或
者(zhe)細胞超聲(sheng)粉碎，離心取上(shang)清液檢測。
3. 血(xue)清：在(zai)室溫下，血(xue)液自然凝固，以1000×g離(li)心(xin)15分鐘，取上清待測(ce)。
4. 血漿：應根據標本的要求選擇(ze)EDTA 或檸(ning)檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分(fen)鐘后，以(yi)1000×g離(li)心15分(fen)鐘，收集上
清。
5. 體液：包括胸腹水(shui)、腦脊液，分泌(mi)物(wu)等。使用不含(han)熱原和內(nei)毒素的離心管收(shou)集，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集上(shang)清。
6. 組織標本：切取(qu)組織標本，稱取(qu)重量0.5mg，加入(ru)500ul 的PBS，用手工(gong)或勻漿器，或超聲(sheng)破碎儀(yi)將標本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分(fen)鐘，收集上清進(jin)行檢測。
7. 樣品中不能含(han)有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性(xing)。
8. 保存：如果樣品不能立(li)即檢測(ce)，應(ying)將其(qi)分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出(chu)現沉淀，應(ying)再次離心(xin)。血液標
本盡可能(neng)的不要(yao)使用溶血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如(ru)果血(xue)清中含大量顆(ke)粒(li)，檢測前先離心或(huo)過濾。不要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解
凍(dong)。應在室溫下解(jie)凍(dong)并確保樣品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。
β-Hex A Elisa Kit 操作步驟(zou)：
1. 取出試(shi)劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根(gen)據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條(tiao)數，把剩余的板條(tiao)繼續冷(leng)藏(zang)處理。分別設標準
品(pin)組(zu)（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為(wei)減少實驗誤差，保證(zheng)準(zhun)確(que)性，建議設置復孔。
3. 加(jia)樣：依照(zhao)標準品的順序分別加(jia)入 50ul 的標準品溶(rong)液于空白(bai)微孔(kong)中；空白(bai)對照(zhao)孔(kong)加(jia)入 50ul 的蒸(zheng)餾水；其余微孔(kong)中加(jia)入 50ul
的(de)待測樣本(ben)。
4. 加酶標溶液(ye)：標準(zhun)品組、待測(ce)樣本(ben)組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(ye)（空白對照孔除(chu)外(wai)）。
5. 溫育(yu)：酶標板用封板紙密封后，放(fang)入濕盒內(nei)于 37℃恒(heng)溫孵育(yu) 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀釋后的洗(xi)滌(di)液注滿每孔，靜置(zhi) 15-30s，充(chong)分清洗(xi)酶標板 5 次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯色：各孔加(jia)入顯色劑(ji)(ji) A 液 50ul 后，再加(jia)入顯色劑(ji)(ji) B 液 50ul。
8. 終止(zhi)：25-37℃下(xia)避光反應 10-15 分(fen)鐘，加入 50ul 終止(zhi)液。
9. 讀(du)板：在 450nm 波(bo)長讀(du)取各(ge)孔的 OD 值。
β-Hex A Elisa Kit 注意事項(xiang)：
1. 實驗操作中必須使用一(yi)次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)時(shi)(shi)，要(yao)控制(zhi)加樣(yang)速(su)度，避(bi)免(mian)**孔與最后(hou)一(yi)孔間(jian)(jian)的(de)時(shi)(shi)間(jian)(jian)間(jian)(jian)隔過大，否則(ze)將會(hui)導致不同(tong)的(de)預(yu)孵育時(shi)(shi)間(jian)(jian)，從而影響
實(shi)驗的準(zhun)確性(xing)以及重復(fu)性(xing)。
3. 孵育：嚴格按(an)照說明書上規定的孵育時(shi)間(jian)和(he)溫度(du)進(jin)行。
4. 反應(ying)時間的控制(zhi)：加(jia)入(ru)底物后請(qing)定(ding)時觀(guan)察反應(ying)孔(kong)的顏色變(bian)化，如果顏色較深，請(qing)提前加(jia)入(ru)終止液終止反應(ying)。
5. 建議實驗前預測樣品(pin)含量，如(ru)樣品(pin)濃度過高，應對樣品(pin)進(jin)行稀(xi)釋(shi)，計算結果時(shi)乘以(yi)相應的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。
6. 建議使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒時(shi)先做預實驗（即先做標準(zhun)曲線，試(shi)用(yong)幾個標本），如(ru)果對(dui)本試(shi)劑(ji)盒有任何(he)疑問，可(ke)和所購(gou)經銷商聯系，
如果因運輸過程導致試(shi)劑(ji)盒(he)失效，可要求調換，但概不(bu)承擔產品本身以外(wai)的(de)任何損失。
β-Hex A Elisa Kit 性能
1. 靈敏度：最小(xiao)的檢(jian)測(ce)濃(nong)度小(xiao)于1號標(biao)準品(pin)。稀釋(shi)度的線(xian)性。樣品(pin)線(xian)性回歸(gui)與預期(qi)濃(nong)度相關系數(shu)R值為0.990。
2. 特異性：不(bu)與其它細胞因(yin)子(zi)反(fan)應。
3. 重復性：板內(nei)、板間變異系數均小于10%。
結(jie)果(guo)判斷(duan)與分(fen)析
1、儀器值(zhi)：于波長450nm的(de)酶標儀上讀取各孔的(de)OD值(zhi)
2、以吸光度OD值(zhi)為縱坐(zuo)標（Y），相(xiang)應(ying)(ying)的(de)待(dai)測(ce)物質(zhi)標準(zhun)品濃度為橫坐(zuo)標（X），做得相(xiang)應(ying)(ying)的(de)曲線(xian)，樣品的(de)待(dai)測(ce)物質(zhi)含量可根據其OD值(zhi)由(you)標準(zhun)曲線(xian)換算(suan)出相(xiang)應(ying)(ying)的(de)濃度。
