TCC C5b-9 Elisa Kit用(yong)途：
本(ben)試(shi)劑盒僅供科研(yan)使(shi)用，定量檢測細胞液(ye)、體液(ye)、組織、血(xue)清(qing)、血(xue)漿等標本(ben)中TCC C5b-9的含量。
原理：
采用(yong)雙抗體夾心(xin)法測(ce)定(ding)TCC C5b-9水平。用純化的TCC C5b-9抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)，實驗時依次在微(wei)孔(kong)板中加(jia)入(ru)樣(yang)本及(ji)標準品，并加(jia)入(ru) HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
TCC C5b-9 Elisa Kit試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮(suo)洗滌(di)液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止(zhi)液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試(shi)劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽(yang)性對(dui)照(zhao) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標(biao)包(bao)被板 | 12 孔×8 條(tiao) | 9 | 陰性(xing)對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣(yang)品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份(fen) |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封(feng)板(ban)膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液(ye) | 6ml×1/瓶 | 12 | 密(mi)封袋 | 1 個(ge) |
TCC C5b-9 Elisa Kit實驗(yan)材料與試劑配制：
1. 儀器(qi)(qi)與(yu)材料：酶標儀（使(shi)用前預熱(re)30分鐘(zhong)），微量(liang)加液器(qi)(qi)、吸(xi)頭、蒸餾水(shui)或去(qu)離子水(shui)，濾紙。
2. 緩(huan)沖液使用(yong)：加5ul 的緩(huan)沖液于(yu)50ul 的樣品(pin)中，如果樣品(pin)量不(bu)夠或者(zhe)不(bu)確定，緩(huan)沖液和樣品(pin)的混合比例(li)不(bu)要小于(yu)1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的(de)配制(zhi)：按1:100的(de)比例配制(zhi)洗液備用。
樣品收集(ji)、處理及保存：
1. 細(xi)(xi)胞培養上清(qing)：適用于(yu)檢測體外(wai)培養的(de)細(xi)(xi)胞分(fen)(fen)泌性成份。用無(wu)菌管收集細(xi)(xi)胞上清(qing)液，以1000×g離心15分(fen)(fen)鐘，收集上清(qing)。
2. 細(xi)胞(bao)：用PBS反復洗滌細(xi)胞(bao)3次，調整細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達到104
-106
/ml 左右，通過反復(fu)凍融(rong)，使細胞(bao)破壞并(bing)放出細胞(bao)內成份，或
者細胞超聲粉碎，離心取上清液(ye)檢測(ce)。
3. 血清(qing)：在室溫下(xia)，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取(qu)上清(qing)待測。
4. 血漿：應(ying)根(gen)據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝(ning)劑(ji)，混合后(hou)(hou)靜置(zhi)10-20 分鐘(zhong)后(hou)(hou)，以1000×g離心15分鐘(zhong)，收(shou)集上
清(qing)。
5. 體液：包括胸腹水(shui)、腦脊(ji)液，分(fen)泌物等(deng)。使用不(bu)含(han)熱原和(he)內毒素的離心管收(shou)(shou)集，以1000×g離心15分(fen)鐘，收(shou)(shou)集上(shang)清。
6. 組(zu)織標本：切取(qu)組(zu)織標本，稱取(qu)重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工(gong)或勻(yun)漿(jiang)器，或超聲破碎儀將標本勻(yun)漿(jiang)，以2000-3000
rmp離心(xin)20 分(fen)鐘，收集上清進行檢測(ce)。
7. 樣品(pin)中(zhong)不能含(han)有NaN3，因NaN3 抑(yi)制辣根(gen)過氧化物酶的（HRP）活性(xing)。
8. 保(bao)(bao)存(cun)：如果樣品不能(neng)立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保(bao)(bao)存(cun)，避免反復冷凍。保(bao)(bao)存(cun)過程中如出現(xian)沉(chen)淀，應再次離心(xin)。血液標
本盡可(ke)能的不要使用溶血或(huo)高血脂血。如果血清中含(han)大量顆粒，檢測前(qian)先離(li)心或(huo)過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解
凍。應(ying)在室(shi)溫下解凍并確保樣(yang)品均勻地充(chong)分解凍。
TCC C5b-9 Elisa Kit操作步驟：
1. 取(qu)出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔(kong)板，根據待(dai)測樣品(pin)數量加上標(biao)準(zhun)品(pin)的數量決定(ding)所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標(biao)準(zhun)
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少(shao)實驗誤差，保(bao)證(zheng)準(zhun)確性，建議設置(zhi)復孔。
3. 加(jia)樣：依照標準(zhun)品(pin)的順序(xu)分別(bie)加(jia)入 50ul 的標準(zhun)品(pin)溶液于空白(bai)微孔(kong)中；空白(bai)對照孔(kong)加(jia)入 50ul 的蒸餾水(shui)；其(qi)余微孔(kong)中加(jia)入 50ul
的待(dai)測樣本。
4. 加(jia)酶標(biao)溶(rong)液：標(biao)準品(pin)組、待測(ce)樣本(ben)組各(ge)孔(kong)中加(jia)入 100ul 的酶標(biao)溶(rong)液（空白對照孔(kong)除外）。
5. 溫育：酶標板用(yong)封板紙密封后(hou)，放(fang)入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗(xi)板：用(yong)(yong)稀釋后的洗(xi)滌液注(zhu)滿每孔，靜(jing)置 15-30s，充分清洗(xi)酶(mei)標(biao)板 5 次，用(yong)(yong)吸水紙徹底拍干。
7. 顯(xian)色(se)：各孔加(jia)入顯(xian)色(se)劑 A 液(ye) 50ul 后，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑 B 液(ye) 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm 波(bo)長讀取各孔(kong)的 OD 值。
TCC C5b-9 Elisa Kit注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加(jia)樣(yang)：加(jia)樣(yang)時(shi)，要(yao)控制加(jia)樣(yang)速度(du)，避免**孔與(yu)最后一孔間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔(ge)過大，否則將會(hui)導致不同的預孵育時(shi)間(jian)，從(cong)而影響
實驗的準確性以及重(zhong)復性。
3. 孵(fu)育(yu)：嚴格按照(zhao)說明(ming)書上規定的孵(fu)育(yu)時間和溫(wen)度(du)進行(xing)。
4. 反(fan)應(ying)時間的控制：加(jia)入底物后請定時觀察(cha)反(fan)應(ying)孔的顏色變化(hua)，如果顏色較深(shen)，請提前加(jia)入終(zhong)止液終(zhong)止反(fan)應(ying)。
5. 建議(yi)實驗前預測樣品(pin)含量(liang)，如樣品(pin)濃(nong)度過高，應對(dui)樣品(pin)進行稀(xi)釋(shi)，計算結果(guo)時乘以相應的稀(xi)釋(shi)倍數。
6. 建議使用(yong)本試劑盒時先(xian)做預實驗(yan)（即(ji)先(xian)做標準曲線，試用(yong)幾個標本），如(ru)果對本試劑盒有任何疑問(wen)，可(ke)和所購經銷商聯(lian)系，
如果因(yin)運(yun)輸(shu)過程(cheng)導致試劑盒失(shi)效，可要求調換，但概(gai)不承擔產品(pin)本身以外的任(ren)何損失(shi)。
TCC C5b-9 Elisa Kit性(xing)能
1. 靈(ling)敏度(du)：最小(xiao)的檢測濃度(du)小(xiao)于1號標準(zhun)品(pin)。稀釋度(du)的線性。樣品(pin)線性回歸與預期濃度(du)相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不(bu)與其它細胞因(yin)子反應。
3. 重復性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間變(bian)異系數均小于10%。
結(jie)果判斷與分(fen)析
1、儀(yi)器值：于波長450nm的(de)酶標儀(yi)上讀取各孔的(de)OD值
2、以吸光度OD值(zhi)(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)（Y），相應(ying)(ying)的(de)待測(ce)物(wu)質(zhi)(zhi)標(biao)準品濃度為(wei)橫坐(zuo)標(biao)（X），做得(de)相應(ying)(ying)的(de)曲線，樣品的(de)待測(ce)物(wu)質(zhi)(zhi)含量(liang)可根據其(qi)OD值(zhi)(zhi)由標(biao)準曲線換算出相應(ying)(ying)的(de)濃度。
