sLR Elisa Kit用途：
本(ben)試劑(ji)盒(he)僅供科(ke)研(yan)使用，定量檢(jian)測細(xi)胞液、體液、組(zu)織、血(xue)清、血(xue)漿等標本(ben)中(zhong)sLR的含量。
原理：
采用(yong)雙抗體夾心法測定sLR水平。用純化的sLR抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗時(shi)依(yi)次在微孔(kong)板中加入(ru)樣本及標準品，并加入(ru) HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
sLR Elisa Kit試劑盒組成：
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液(ye) | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑(ji) | 6ml×1瓶(ping) | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標(biao)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀(xi)釋液 | 6ml×1 瓶(ping) | 10 | 說明(ming)書(shu) | 1 份(fen) |
5 | 顯色劑(ji) A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板(ban)膜 | 2 張 |
6 | 顯色(se)劑(ji) B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋(dai) | 1 個(ge) |
sLR Elisa Kit實驗材(cai)料(liao)與(yu)試劑(ji)配制：
1. 儀器(qi)與材料：酶標儀（使用前預熱30分(fen)鐘(zhong)），微量加液器(qi)、吸頭(tou)、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩(huan)沖(chong)液使用(yong)：加5ul 的(de)緩(huan)沖(chong)液于50ul 的(de)樣品中，如果(guo)樣品量不夠或者不確定，緩(huan)沖(chong)液和樣品的(de)混合(he)比例不要小于1:10即可(ke)。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液(ye)的配制：按1:100的比例(li)配制洗液(ye)備(bei)用。
樣品收集(ji)、處理及保存(cun)：
1. 細(xi)胞(bao)(bao)培養上(shang)清(qing)：適用(yong)于(yu)檢測體(ti)外培養的細(xi)胞(bao)(bao)分(fen)泌性(xing)成份(fen)。用(yong)無菌管收(shou)集細(xi)胞(bao)(bao)上(shang)清(qing)液，以1000×g離心15分(fen)鐘，收(shou)集上(shang)清(qing)。
2. 細(xi)胞(bao)：用PBS反復洗滌細(xi)胞(bao)3次，調整(zheng)細(xi)胞(bao)濃度(du)達到104
-106
/ml 左右，通(tong)過反復凍(dong)融，使細胞破壞(huai)并放(fang)出(chu)細胞內成份(fen)，或
者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室(shi)溫下，血液自然凝固，以1000×g離(li)心15分鐘，取上清待測(ce)。
4. 血漿：應根據標(biao)本的要求選擇EDTA 或檸(ning)檬酸(suan)鈉作為抗凝劑(ji)，混合后(hou)靜置10-20 分鐘后(hou)，以(yi)1000×g離心15分鐘，收集(ji)上
清。
5. 體液：包括胸腹(fu)水、腦(nao)脊液，分泌物等。使(shi)用不含(han)熱原和內毒素的離(li)心管收(shou)集(ji)，以(yi)1000×g離(li)心15分鐘，收(shou)集(ji)上(shang)清。
6. 組織標本：切取(qu)(qu)組織標本，稱取(qu)(qu)重量0.5mg，加入(ru)500ul 的(de)PBS，用手工或(huo)勻漿器，或(huo)超聲破碎儀將(jiang)標本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上(shang)清進行(xing)檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存(cun)：如(ru)果樣品不(bu)能立(li)即檢(jian)測(ce)，應將其分(fen)裝，-70 ℃保存(cun)，避免反復冷凍(dong)。保存(cun)過程中如(ru)出現沉(chen)淀(dian)，應再次(ci)離心。血液標
本盡可能的不(bu)要(yao)使用溶(rong)血(xue)或高血(xue)脂血(xue)。如果血(xue)清中含大量顆(ke)粒，檢測前先離心或過濾。不(bu)要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解
凍。應在室溫下解(jie)凍并確保樣品均勻地充分(fen)解(jie)凍。
sLR Elisa Kit操(cao)作(zuo)步驟(zou)：
1. 取出試劑(ji)盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘(zhong)。
2. 分(fen)組：取出(chu) 96 孔板(ban)，根據待測樣品數(shu)量(liang)加上標準(zhun)品的(de)數(shu)量(liang)決定所需的(de)板(ban)條數(shu)，把剩余(yu)的(de)板(ban)條繼續(xu)冷(leng)藏處理。分(fen)別設標準(zhun)
品組(zu)（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注(zhu)：為減少(shao)實驗(yan)誤差，保證準確(que)性，建議(yi)設置復孔。
3. 加(jia)(jia)樣(yang)：依照標(biao)準品的(de)(de)順(shun)序分別加(jia)(jia)入 50ul 的(de)(de)標(biao)準品溶液于空(kong)白微孔(kong)中；空(kong)白對照孔(kong)加(jia)(jia)入 50ul 的(de)(de)蒸餾(liu)水；其余微孔(kong)中加(jia)(jia)入 50ul
的待測樣(yang)本。
4. 加(jia)酶(mei)標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加(jia)入(ru) 100ul 的酶(mei)標溶液（空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙(zhi)密封后(hou)，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀釋后的洗(xi)滌液注滿每(mei)孔，靜置 15-30s，充分清洗(xi)酶標板 5 次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯(xian)色(se)：各孔(kong)加入(ru)顯(xian)色(se)劑 A 液(ye)(ye) 50ul 后，再(zai)加入(ru)顯(xian)色(se)劑 B 液(ye)(ye) 50ul。
8. 終(zhong)止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終(zhong)止液。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
sLR Elisa Kit注意(yi)事項(xiang)：
1. 實驗操(cao)作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)時，要控制加樣(yang)速度，避免**孔與最后一(yi)孔間(jian)的(de)時間(jian)間(jian)隔過大，否則將會(hui)導致(zhi)不同的(de)預(yu)孵育時間(jian)，從(cong)而影響
實驗(yan)的準確性(xing)以及重復性(xing)。
3. 孵育(yu)：嚴格按照說(shuo)明書(shu)上規定的孵育(yu)時(shi)間和(he)溫度進行。
4. 反(fan)應時(shi)間的(de)控制：加入(ru)底物后請定時(shi)觀(guan)察反(fan)應孔(kong)的(de)顏(yan)(yan)色變化(hua)，如果顏(yan)(yan)色較深，請提前加入(ru)終止液終止反(fan)應。
5. 建(jian)議實驗前預測樣(yang)品(pin)含量，如樣(yang)品(pin)濃度過高，應對(dui)樣(yang)品(pin)進行稀釋，計算結(jie)果時乘(cheng)以相應的稀釋倍數。
6. 建議使用本(ben)試劑盒時(shi)先做(zuo)預(yu)實驗（即先做(zuo)標(biao)準曲線(xian)，試用幾個標(biao)本(ben)），如果(guo)對(dui)本(ben)試劑盒有任何(he)疑問，可和所購經銷商聯系，
如(ru)果(guo)因運(yun)輸過(guo)程導致試劑盒失效(xiao)，可(ke)要求(qiu)調換，但(dan)概不承擔產(chan)品(pin)本身以外的任(ren)何損失。
sLR Elisa Kit性(xing)能
1. 靈敏度：最(zui)小的檢測濃度小于(yu)1號標準(zhun)品(pin)。稀釋度的線性。樣(yang)品(pin)線性回歸(gui)與預期濃度相關系數(shu)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它(ta)細胞因子反應。
3. 重(zhong)復(fu)性：板(ban)內、板(ban)間變異(yi)系數均小(xiao)于10%。
結(jie)果判斷與分析
1、儀(yi)器值：于波長450nm的酶(mei)標儀(yi)上讀(du)取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為(wei)縱坐(zuo)標（Y），相應的待測物質(zhi)標準品濃度為(wei)橫(heng)坐(zuo)標（X），做得相應的曲線，樣品的待測物質(zhi)含量可根據(ju)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
