sMHC-2 Elisa Kit用途(tu)：
本試劑盒僅供科研使用，定(ding)量檢測細胞(bao)液(ye)、體液(ye)、組(zu)織、血(xue)清、血(xue)漿等標本中(zhong)sMHC-2的含量。
原理：
采用(yong)雙抗體夾心(xin)法測(ce)定sMHC-2水平。用純化的sMHC-2抗體包被微孔板，制成固相載
體(ti)，實驗時依(yi)次在微(wei)孔(kong)板中加入樣本及標準品，并加入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
sMHC-2 Elisa Kit試劑盒組(zu)成：
1 | 30 倍濃縮洗滌液(ye) | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液(ye) | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性(xing)對照(zhao) | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶(mei)標包被(bei)板 | 12 孔(kong)×8 條 | 9 | 陰性(xing)對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶(ping) | 10 | 說明書 | 1 份(fen) |
5 | 顯色劑(ji) A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個(ge) |
sMHC-2 Elisa Kit實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶(mei)標(biao)儀（使用前預熱(re)30分(fen)鐘），微(wei)量加液(ye)器、吸頭、蒸餾水或(huo)去離(li)子水，濾紙。
2. 緩(huan)(huan)沖液使用：加5ul 的緩(huan)(huan)沖液于50ul 的樣品中，如果樣品量(liang)不(bu)(bu)夠(gou)或者不(bu)(bu)確定，緩(huan)(huan)沖液和(he)樣品的混(hun)合比例(li)不(bu)(bu)要(yao)小于1:10即可(ke)。
混勻，靜置(zhi)1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配(pei)制：按1:100的比(bi)例配(pei)制洗液備用(yong)。
樣品收集、處理及(ji)保存：
1. 細胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)上(shang)清(qing)：適用(yong)于檢測體外培(pei)(pei)養(yang)的(de)細胞(bao)分泌性成(cheng)份。用(yong)無菌管收集(ji)細胞(bao)上(shang)清(qing)液，以1000×g離心15分鐘，收集(ji)上(shang)清(qing)。
2. 細胞：用PBS反復洗(xi)滌細胞3次，調整細胞濃度達到104
-106
/ml 左右(you)，通過反(fan)復凍融，使(shi)細胞破壞并放出細胞內成份，或(huo)
者細胞超(chao)聲粉碎(sui)，離心取上清液檢(jian)測。
3. 血清(qing)：在室(shi)溫下，血液自然凝固(gu)，以(yi)1000×g離心15分鐘，取(qu)上清(qing)待測。
4. 血漿(jiang)：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸(ning)檬酸鈉作(zuo)為抗凝(ning)劑，混合后(hou)靜(jing)置10-20 分鐘(zhong)后(hou)，以(yi)1000×g離心15分鐘(zhong)，收集上(shang)
清。
5. 體液：包括(kuo)胸腹(fu)水、腦脊(ji)液，分泌物等。使用(yong)不含熱原和內毒素的(de)離心管(guan)收(shou)集，以(yi)1000×g離心15分鐘，收(shou)集上(shang)清(qing)。
6. 組(zu)織(zhi)標本(ben)：切取組(zu)織(zhi)標本(ben)，稱(cheng)取重量0.5mg，加入(ru)500ul 的(de)PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本(ben)勻漿，以(yi)2000-3000
rmp離心20 分(fen)鐘，收(shou)集上清進行檢(jian)測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶(mei)的（HRP）活性(xing)。
8. 保存：如(ru)果樣品不能(neng)立即檢(jian)測，應(ying)將其分裝，-70 ℃保存，避(bi)免(mian)反復冷凍。保存過程中(zhong)如(ru)出(chu)現沉(chen)淀，應(ying)再次離心。血液標
本盡(jin)可能的不(bu)要(yao)使(shi)用溶血(xue)或高血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中(zhong)含大(da)量顆粒，檢測前先離心(xin)或過濾。不(bu)要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解
凍(dong)。應在室(shi)溫下解凍(dong)并確保樣品(pin)均勻地充分解凍(dong)。
sMHC-2 Elisa Kit操作步驟：
1. 取出試劑(ji)盒(he)，室(shi)溫（20-25℃）放置(zhi) 30 分鐘。
2. 分(fen)組：取出 96 孔板(ban)(ban)，根據待測樣品(pin)數(shu)量加上標準品(pin)的數(shu)量決(jue)定所需的板(ban)(ban)條(tiao)數(shu)，把剩余的板(ban)(ban)條(tiao)繼續冷藏處理(li)。分(fen)別設標準
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實驗誤差，保證準確(que)性，建議設置復孔。
3. 加樣：依照標準(zhun)(zhun)品的順序分別加入(ru) 50ul 的標準(zhun)(zhun)品溶液于空白微(wei)孔中；空白對照孔加入(ru) 50ul 的蒸(zheng)餾水；其余微(wei)孔中加入(ru) 50ul
的待測樣(yang)本(ben)。
4. 加酶標(biao)(biao)溶(rong)液：標(biao)(biao)準品組、待測(ce)樣本組各(ge)孔中(zhong)加入 100ul 的酶標(biao)(biao)溶(rong)液（空白對照孔除外）。
5. 溫(wen)育：酶標(biao)板(ban)用封(feng)板(ban)紙密(mi)封(feng)后(hou)，放入濕(shi)盒內于 37℃恒溫(wen)孵育 1 小時。
6. 洗(xi)板：用(yong)稀釋后的洗(xi)滌(di)液注(zhu)滿(man)每孔，靜置 15-30s，充(chong)分清洗(xi)酶標(biao)板 5 次，用(yong)吸水(shui)紙徹底拍干。
7. 顯(xian)色(se)：各孔加入顯(xian)色(se)劑 A 液(ye) 50ul 后，再(zai)加入顯(xian)色(se)劑 B 液(ye) 50ul。
8. 終(zhong)止：25-37℃下避光反應(ying) 10-15 分鐘(zhong)，加入 50ul 終(zhong)止液。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取(qu)各孔的(de) OD 值。
sMHC-2 Elisa Kit注意事(shi)項：
1. 實驗操作中必須(xu)使用一次性吸(xi)頭，避(bi)免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避(bi)免**孔與最(zui)后一孔間(jian)的(de)時間(jian)間(jian)隔(ge)過大，否則(ze)將(jiang)會導致不同的(de)預孵育時間(jian)，從(cong)而(er)影響
實驗的準確性(xing)以及重復性(xing)。
3. 孵育(yu)：嚴格按照說明書上(shang)規定(ding)的孵育(yu)時間和溫度進行(xing)。
4. 反應時間的控制(zhi)：加(jia)入(ru)底物后請(qing)定(ding)時觀察反應孔的顏色(se)變化，如(ru)果顏色(se)較深，請(qing)提前加(jia)入(ru)終止液終止反應。
5. 建議實驗前預測樣品含量(liang)，如(ru)樣品濃度過高，應對樣品進行(xing)稀(xi)釋，計算(suan)結果時乘以(yi)相應的稀(xi)釋倍數(shu)。
6. 建議使用(yong)本(ben)試劑盒時(shi)先做(zuo)預(yu)實驗（即先做(zuo)標準曲(qu)線(xian)，試用(yong)幾個標本(ben)），如果(guo)對本(ben)試劑盒有任何疑問，可和(he)所購經銷商聯系，
如果因運(yun)輸過程導致試(shi)劑盒失(shi)效，可要求調換，但概不承(cheng)擔產品(pin)本身以外的任何損失(shi)。
sMHC-2 Elisa Kit性能
1. 靈(ling)敏(min)度(du)(du)：最(zui)小的檢測濃度(du)(du)小于(yu)1號(hao)標準品(pin)。稀釋度(du)(du)的線(xian)性(xing)(xing)。樣品(pin)線(xian)性(xing)(xing)回歸與預(yu)期濃度(du)(du)相關系數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特異性(xing)：不與(yu)其它細胞因(yin)子反應。
3. 重復性：板內、板間變異(yi)系數均小于(yu)10%。
結(jie)果判斷與(yu)分析
1、儀器值：于波長450nm的(de)酶標儀上讀(du)取各(ge)孔(kong)的(de)OD值
2、以吸光度(du)OD值(zhi)為縱坐標(biao)（Y），相應的待測物質標(biao)準品(pin)濃度(du)為橫坐標(biao)（X），做(zuo)得相應的曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的待測物質含量(liang)可根據其OD值(zhi)由標(biao)準曲線(xian)換算出相應的濃度(du)。
