β-cat Elisa Kit用(yong)途：
本(ben)試劑盒僅供科研使用，定(ding)量(liang)檢(jian)測細胞(bao)液、體液、組織(zhi)、血清(qing)、血漿等標本(ben)中(zhong)β-cat的含量。
原理：
采用雙抗體夾心法(fa)測定(ding)β-cat水平。用純化的β-cat抗體包被微孔板，制成固相載
體，實(shi)驗時依次在微(wei)孔板(ban)中加入(ru)樣本及標準品，并加入(ru) HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
β-cat Elisa Kit試劑盒組成(cheng)：
1 | 30 倍濃(nong)縮洗滌液 | 20ml×1 瓶(ping) | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑(ji) | 6ml×1瓶(ping) | 8 | 陽(yang)性對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板 | 12 孔(kong)×8 條 | 9 | 陰性(xing)對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣(yang)品稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜(mo) | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液(ye) | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封(feng)袋 | 1 個 |
β-cat Elisa Kit實驗材料與試劑配制：
1. 儀器(qi)(qi)與材料：酶(mei)標儀（使(shi)用前(qian)預熱30分鐘(zhong)），微量加液器(qi)(qi)、吸(xi)頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩(huan)沖(chong)液使用：加(jia)5ul 的緩(huan)沖(chong)液于(yu)50ul 的樣(yang)品中，如果樣(yang)品量(liang)不夠或者不確定，緩(huan)沖(chong)液和樣(yang)品的混合比例不要小于(yu)1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗(xi)(xi)液的(de)配制(zhi)：按1:100的(de)比(bi)例配制(zhi)洗(xi)(xi)液備用(yong)。
樣品收集(ji)、處(chu)理及保存：
1. 細(xi)胞培養(yang)上(shang)清：適(shi)用(yong)于檢測體外(wai)培養(yang)的(de)細(xi)胞分泌性成份。用(yong)無菌管收集細(xi)胞上(shang)清液，以(yi)1000×g離心(xin)15分鐘，收集上(shang)清。
2. 細胞(bao)(bao)：用PBS反(fan)復洗滌(di)細胞(bao)(bao)3次，調(diao)整細胞(bao)(bao)濃度達到104
-106
/ml 左右，通過反(fan)復凍融，使(shi)細胞(bao)破壞(huai)并放出細胞(bao)內成份，或
者細胞超聲粉碎，離(li)心取上清液檢測。
3. 血清(qing)：在(zai)室溫(wen)下，血液自然凝固(gu)，以(yi)1000×g離心15分鐘，取上清(qing)待(dai)測。
4. 血漿：應根據標本的要求(qiu)選擇(ze)EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分(fen)鐘后，以1000×g離心15分(fen)鐘，收集上
清。
5. 體液：包括胸(xiong)腹水、腦(nao)脊液，分(fen)泌物等。使用不含(han)熱原和內(nei)毒素的(de)離心(xin)管收集，以1000×g離心(xin)15分(fen)鐘，收集上清。
6. 組織標本：切取(qu)組織標本，稱取(qu)重量0.5mg，加(jia)入500ul 的PBS，用(yong)手(shou)工或(huo)勻(yun)漿器(qi)，或(huo)超(chao)聲破(po)碎儀將(jiang)標本勻(yun)漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上(shang)清進(jin)行檢測。
7. 樣品中(zhong)不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guo)氧化物酶的（HRP）活(huo)性。
8. 保(bao)存(cun)：如(ru)果樣品不能立即檢(jian)測，應(ying)將其分裝(zhuang)，-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免反復冷凍。保(bao)存(cun)過程中如(ru)出現沉淀，應(ying)再次(ci)離心。血液標(biao)
本盡(jin)可(ke)能的不要(yao)使(shi)用溶血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如果血(xue)清(qing)中含大量顆(ke)粒，檢測前(qian)先離心或(huo)過濾。不要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解
凍。應(ying)在室溫下解(jie)凍并確保樣品均勻地充分解(jie)凍。
β-cat Elisa Kit操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分(fen)鐘。
2. 分組：取出(chu) 96 孔板，根據待測樣品(pin)數(shu)量加上標準品(pin)的數(shu)量決定所需的板條(tiao)數(shu)，把剩余的板條(tiao)繼續冷(leng)藏處理。分別(bie)設標準
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實(shi)驗誤差(cha)，保(bao)證準確性，建議設置復(fu)孔。
3. 加樣：依照(zhao)標準品的(de)順序分別加入 50ul 的(de)標準品溶(rong)液于(yu)空(kong)白微孔(kong)中；空(kong)白對(dui)照(zhao)孔(kong)加入 50ul 的(de)蒸餾水；其余微孔(kong)中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加(jia)酶標(biao)溶液：標(biao)準品組、待測(ce)樣本組各孔中加(jia)入 100ul 的酶標(biao)溶液（空白對照(zhao)孔除外）。
5. 溫(wen)育：酶標板用封板紙(zhi)密封后，放(fang)入濕盒內(nei)于 37℃恒溫(wen)孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌(di)液注(zhu)滿每孔，靜置 15-30s，充分清(qing)洗酶標板 5 次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯(xian)(xian)色：各孔加(jia)入顯(xian)(xian)色劑(ji) A 液 50ul 后，再加(jia)入顯(xian)(xian)色劑(ji) B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反(fan)應 10-15 分(fen)鐘(zhong)，加入 50ul 終止液(ye)。
9. 讀(du)板：在 450nm 波長(chang)讀(du)取各孔(kong)的 OD 值。
β-cat Elisa Kit注意事項：
1. 實(shi)驗操作中必須使用(yong)一次性吸頭，避免交叉污(wu)染。
2. 加(jia)樣(yang)：加(jia)樣(yang)時(shi)，要控制(zhi)加(jia)樣(yang)速(su)度，避免**孔與最后(hou)一孔間的時(shi)間間隔過大，否則將會導致不同(tong)的預孵育時(shi)間，從(cong)而(er)影響
實驗的(de)準確性(xing)以及重(zhong)復性(xing)。
3. 孵育：嚴格按照說明(ming)書上(shang)規定的(de)孵育時間(jian)和溫度進行。
4. 反(fan)應(ying)時間的控制：加入(ru)(ru)底物(wu)后請(qing)定時觀察反(fan)應(ying)孔的顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)，如果顏(yan)色(se)較深，請(qing)提前加入(ru)(ru)終(zhong)止液終(zhong)止反(fan)應(ying)。
5. 建議實驗(yan)前(qian)預測樣(yang)品含量，如樣(yang)品濃度過高，應(ying)對樣(yang)品進行(xing)稀釋(shi)，計算(suan)結果時乘(cheng)以相應(ying)的稀釋(shi)倍數。
6. 建(jian)議(yi)使用(yong)本試劑(ji)盒時(shi)先做預(yu)實驗(yan)（即先做標(biao)準曲(qu)線(xian)，試用(yong)幾(ji)個標(biao)本），如(ru)果對本試劑(ji)盒有任何(he)疑問(wen)，可和所購(gou)經銷(xiao)商聯(lian)系，
如果因運輸過程(cheng)導致(zhi)試劑(ji)盒(he)失(shi)效，可(ke)要求調換，但概(gai)不承擔產品(pin)本(ben)身以外的(de)任何損失(shi)。
β-cat Elisa Kit性(xing)能
1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于(yu)1號標準品(pin)。稀釋度的線(xian)性。樣品(pin)線(xian)性回歸與預期濃度相(xiang)關(guan)系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xi)胞因子反應。
3. 重復性：板(ban)內、板(ban)間變異系數均(jun)小于(yu)10%。
結(jie)果判(pan)斷與(yu)分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取(qu)各孔(kong)的OD值
2、以吸光(guang)度OD值為縱坐標（Y），相應(ying)的(de)待(dai)測物(wu)質(zhi)標準(zhun)(zhun)品(pin)濃度為橫坐標（X），做得相應(ying)的(de)曲(qu)線，樣品(pin)的(de)待(dai)測物(wu)質(zhi)含量可根據其(qi)OD值由標準(zhun)(zhun)曲(qu)線換算(suan)出相應(ying)的(de)濃度。
