snRNP/Sm Elisa Kit 用(yong)途：
本(ben)試劑盒僅供科研(yan)使用，定(ding)量檢測細胞(bao)液、體(ti)液、組織、血(xue)清、血(xue)漿等(deng)標本(ben)中(zhong)snRNP/Sm 的含量。
原理(li)：
采用雙抗(kang)體夾(jia)心法測定snRNP/Sm 水平。用純化的snRNP/Sm 抗體包被微孔板，制成固相載
體，實驗(yan)時依次在(zai)微(wei)孔板中加(jia)入(ru)樣本及標準品，并加(jia)入(ru) HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。
snRNP/Sm Elisa Kit 試劑盒(he)組成：
1 | 30 倍濃縮洗(xi)滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶(mei)標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶(ping) |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋(shi)液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
5 | 顯色(se)劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封(feng)板膜 | 2 張 |
6 | 顯色(se)劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋(dai) | 1 個 |
snRNP/Sm Elisa Kit 實驗材料與試劑(ji)配制：
1. 儀器(qi)與材(cai)料：酶標儀（使(shi)用前(qian)預熱30分鐘），微量(liang)加液器(qi)、吸(xi)頭(tou)、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩沖液使用：加5ul 的(de)緩沖液于(yu)50ul 的(de)樣品中(zhong)，如果樣品量不夠或者不確(que)定，緩沖液和(he)樣品的(de)混(hun)合比(bi)例不要小于(yu)1:10即可(ke)。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的(de)(de)配制(zhi)：按1:100的(de)(de)比例配制(zhi)洗液備用。
樣品(pin)收集(ji)、處理(li)及保存：
1. 細(xi)胞培養上(shang)清：適(shi)用(yong)于檢(jian)測體外培養的細(xi)胞分泌性成份。用(yong)無菌管(guan)收(shou)集細(xi)胞上(shang)清液，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集上(shang)清。
2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次(ci)，調整細胞濃度(du)達到104
-106
/ml 左右，通過(guo)反復凍融，使細胞破壞并放出(chu)細胞內成(cheng)份，或
者細胞超聲粉碎，離心取(qu)上清液檢測。
3. 血(xue)清：在室溫(wen)下，血(xue)液自然凝(ning)固，以(yi)1000×g離心15分(fen)鐘，取上(shang)清待測。
4. 血漿(jiang)：應根據(ju)標本的要(yao)求選擇EDTA 或檸(ning)檬酸(suan)鈉作為抗凝劑(ji)，混合(he)后(hou)靜置10-20 分鐘后(hou)，以1000×g離心15分鐘，收(shou)集上
清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分(fen)泌(mi)物等。使用不含熱(re)原和(he)內毒(du)素的(de)離心管收(shou)集(ji)，以1000×g離心15分(fen)鐘，收(shou)集(ji)上清。
6. 組織(zhi)標本：切(qie)取組織(zhi)標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手(shou)工或(huo)勻(yun)(yun)漿器，或(huo)超聲破碎(sui)儀將標本勻(yun)(yun)漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上(shang)清進行(xing)檢測。
7. 樣品中(zhong)不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guo)氧化物(wu)酶的（HRP）活(huo)性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(ying)將其(qi)分裝(zhuang)，-70 ℃保存，避(bi)免反復冷凍。保存過程(cheng)中(zhong)如出現沉淀(dian)，應(ying)再次離心(xin)。血液標
本盡可能的(de)不(bu)要(yao)使用(yong)溶血或(huo)高血脂(zhi)血。如果(guo)血清中含(han)大量顆粒(li)，檢測前先離(li)心或(huo)過濾。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或更高的溫度加熱解
凍(dong)。應在室溫下解凍(dong)并確保樣品均勻地(di)充分(fen)解凍(dong)。
snRNP/Sm Elisa Kit 操作步驟：
1. 取出試(shi)劑盒(he)，室溫（20-25℃）放置 30 分(fen)鐘(zhong)。
2. 分組：取出(chu) 96 孔板，根據(ju)待(dai)測樣(yang)品數量加上標準品的(de)數量決定(ding)所需的(de)板條(tiao)數，把剩余(yu)的(de)板條(tiao)繼續冷藏處(chu)理。分別設(she)標準
品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為(wei)減少(shao)實驗(yan)誤差，保證準確(que)性(xing)，建議設(she)置復(fu)孔。
3. 加(jia)樣(yang)：依(yi)照(zhao)標準品的順序分別(bie)加(jia)入 50ul 的標準品溶液(ye)于空白微孔(kong)中；空白對照(zhao)孔(kong)加(jia)入 50ul 的蒸餾水(shui)；其余(yu)微孔(kong)中加(jia)入 50ul
的待(dai)測樣(yang)本。
4. 加酶(mei)標(biao)溶液(ye)：標(biao)準品組(zu)、待測樣(yang)本(ben)組(zu)各孔(kong)中加入 100ul 的酶(mei)標(biao)溶液(ye)（空(kong)白對照孔(kong)除外）。
5. 溫(wen)育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫(wen)孵育 1 小時。
6. 洗(xi)板：用稀釋(shi)后的(de)洗(xi)滌液注滿每孔(kong)，靜置 15-30s，充分清洗(xi)酶標板 5 次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑(ji) A 液 50ul 后，再(zai)加入顯色劑(ji) B 液 50ul。
8. 終(zhong)止(zhi)(zhi)：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終(zhong)止(zhi)(zhi)液(ye)。
9. 讀板：在 450nm 波(bo)長讀取各(ge)孔的 OD 值。
snRNP/Sm Elisa Kit 注(zhu)意事項：
1. 實驗操作中必(bi)須使用一次性吸頭(tou)，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時(shi)，要控制加樣速度，避免**孔與最后一孔間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔過大，否則將會導(dao)致不同(tong)的(de)預孵育時(shi)間(jian)，從而影響
實(shi)驗(yan)的準確性(xing)以及重(zhong)復(fu)性(xing)。
3. 孵(fu)(fu)育(yu)：嚴格按照說明(ming)書上規(gui)定的孵(fu)(fu)育(yu)時間(jian)和溫度(du)進(jin)行。
4. 反(fan)應(ying)(ying)時間的控(kong)制：加入底物后請定時觀察反(fan)應(ying)(ying)孔的顏(yan)色變化，如果顏(yan)色較(jiao)深，請提前(qian)加入終止液終止反(fan)應(ying)(ying)。
5. 建議實驗(yan)前預測樣品含量，如樣品濃度過(guo)高，應對樣品進行稀釋，計算(suan)結(jie)果時乘以相應的(de)稀釋倍數。
6. 建議使(shi)用本(ben)試劑盒(he)時先做(zuo)預(yu)實驗（即先做(zuo)標(biao)準曲線，試用幾個標(biao)本(ben)），如(ru)果對本(ben)試劑盒(he)有(you)任(ren)何疑問，可(ke)和所購經銷商聯系，
如(ru)果(guo)因運輸過(guo)程導致試劑盒(he)失效，可要(yao)求調換，但(dan)概(gai)不(bu)承擔產品本身以外的任何(he)損(sun)失。
snRNP/Sm Elisa Kit 性能
1. 靈敏度：最(zui)小(xiao)(xiao)的檢(jian)測濃(nong)度小(xiao)(xiao)于(yu)1號標準品。稀釋(shi)度的線性(xing)。樣品線性(xing)回歸與預(yu)期(qi)濃(nong)度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其(qi)它細胞(bao)因子反應。
3. 重復性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異系數均(jun)小于10%。
結果判斷與分析
1、儀器(qi)值(zhi)(zhi)：于波(bo)長(chang)450nm的酶標儀上(shang)讀(du)取各孔(kong)的OD值(zhi)(zhi)
2、以(yi)吸光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)(zuo)標（Y），相應的(de)待測物質標準(zhun)品濃度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)(zuo)標（X），做得(de)相應的(de)曲線，樣(yang)品的(de)待測物質含量(liang)可根據其OD值(zhi)由標準(zhun)曲線換算出相應的(de)濃度(du)。
