人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIVIgG)ELISA試劑盒間接法(檢測未知抗體)

1、用包被緩沖液將(jiang)已知抗原稀釋至(zhi)1-10ug/ml， 每孔(kong)加(jia)0.1ml，4℃過(guo)夜。次日洗滌3次。

2、加(jia)樣(yang)：加(jia)一定稀釋(shi)的待檢樣(yang)品(pin)(未知抗體)0.05ml于(yu)上述(shu)已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shi),洗滌(di)。(同(tong)時(shi)做(zuo)空白、陰性及(ji)陽性孔對照)

3、加酶標抗體(ti)：于(yu)反應孔中，加入新鮮稀(xi)釋的(de)酶標第二(er)抗體(ti)(抗抗體(ti))0.05ml，37℃孵育30-60分(fen)鐘，洗滌,最(zui)后一遍用DDW洗滌。

4、加(jia)底物液(ye)顯色：于各反應孔中加(jia)入臨(lin)時配制的TMB底物溶液(ye)0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終(zhong)止反(fan)應：于各反(fan)應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果(guo)判定：可(ke)于(yu)白色(se)背景(jing)上(shang)，直(zhi)接(jie)用肉眼(yan)觀(guan)察結果(guo)：反應孔(kong)內顏(yan)色(se)越深(shen)，陽性(xing)程度越強，陰(yin)性(xing)反應為(wei)無色(se)或極(ji)淺，依據所呈顏(yan)色(se)的深(shen)淺，以(yi)“+”、“-”號(hao)表示(shi)。也可(ke)測OD值(zhi)(zhi)：在(zai)ELISA檢測儀上(shang)，于(yu)450nm(若以(yi)ABTS顯(xian)色(se)，則410nm)處，以(yi)空白對照孔(kong)調零后測各孔(kong)OD值(zhi)(zhi)，若大(da)于(yu)規定的陰(yin)性(xing)對照OD值(zhi)(zhi)的2.1倍，即(ji)為(wei)陽性(xing)。