ELISA試劑盒的操作方法，那么在操作過程中還有些細節要點需要注意：

在使用前與室溫平衡，再進行測定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。

ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。

如果對ELISA試劑盒準備不太注意，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題影響后面的操作。

1.測定中試劑的準備最為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度較快地達到所要求的高度，此外，ELISA試劑盒當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。以滿足測定要求。
2. 請每次測定的同時做標準曲線，**做復孔。

3. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定。

4. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，ELISA試劑盒不能混淆。

5. 底物請避光保存。

6. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

7. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

8. 一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

9、控制好ELISA試劑盒每一步的操作時間。